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回收目的片段的实验步骤介绍

阅读:1142发布时间:2010-11-8

前言:本实验采用电泳回收法。通过特别的 V 形电泳槽,将挖出的含有目的片段的凝胶置于 V 形槽前,接通电泳电源, DNA 即进入 V 形管中,回收 V 形管中溶液即可, 回收的 DNA 片段能保持较高的浓度。

实验步骤:
1. 大量酶切产物的电泳分离:琼脂糖为 0.8 %,选用大型电泳槽及厚梳子,并载低电压下电泳以提高分辨率。
2. 紫外灯下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝胶。
3. 把凝胶片置于特制的 V 型槽平台上,在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 电泳缓冲液(使其刚好淹过胶面),再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ,接通电源进行电泳。
4. 紫外灯下检测凝胶块是否含有 DNA ,判断 DNA 是否全部进入 V 形管溶液中。
5. 当 DNA 进入 V 形管中,放掉电泳槽中的缓冲液,吸出 V 形管中的溶液。
6. 溶液加两倍体积的*,混匀,置- 70 ℃ 两小时或者- 20 ℃ 过夜。
7.1200rpm 离心 10 分钟,沉淀用 70 %酒精洗一次,风干,加入 10ul 与 8ul TE 及 1ul 载样缓冲液混合,电泳检查并根据带的亮度估算其浓度。
提示:本文目的片段的回收方法属于DNA实验文章,主要介绍基因片段方面的知识,内容仅供学习交流与参考。


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