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711次金属硫蛋白的纯化,也就是MT粗品(60%~90%)、MT精品(≥90%)以及纯品(≥95%)的形成过程。由报道的资料看,纯化方法大概是一致的,首先是根据MT-1和MT-2所带电荷不同的性质,进行离子交换将MT-1和MT-2分开,然后将收集MT-1和MT-2的层析液分别进行脱盐,zui后收集冻干、保存。
取匀浆液直接上Sephadex G-50柱(4.5×100cm)进行分离,以0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6缓冲液洗脱。收集含MT组分层析液,再上预先用0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6缓冲液平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow(3×70cm)柱进行离子交换层析,以Tris缓冲液进行直线梯度洗脱(A液:0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6; B液:0.25mol/L Tris-HCl,pH8.6)。分别收集含MT-1和MT-2组分,冷冻干燥浓缩成体积15~20mL,再分别上预先用0.01mol/L碳酸铵平衡好的Sephadex G-25柱(1.6×120cm)进行脱盐。所得MT-1和MT-2冷冻干燥后保存于-20℃冰箱中。
虽然文献中讲到许多分离纯化方法,但是多为实验室研究,真正运用到实际生产的并不多,这主要与实际生产中的各种环境因素的影响有关。在实验中发现,诱导后家兔肝脏中MT的含量愈高,实际生产中MT的提取率就愈大,相反,MT的提取率就愈低。
金属硫蛋白的用途:
金属硫蛋白是一类富含半*和金属的低分子蛋白质。由于它大量的结合多种金属离子,具有特种的生理功能,为生物化学领域所重视。
因此,金属硫蛋白MT可应用于包括医药、食品保健及化妆品添加剂、基因工程试剂、化学、环保、动物、农业等实验用品等等,前景十分广阔。
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