大鼠儿茶酚胺（CA）ELISA试剂盒说明书

                       大鼠儿茶酚胺（CA）ELISA试剂盒说明书

大鼠儿茶酚胺,大鼠儿茶酚胺（CA）ELISA试剂盒原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠儿茶酚胺（CA）单抗包被于酶标板上，标准品和样品 中的 大鼠儿茶酚胺（CA）与单抗结合，加入*化的抗大鼠儿茶酚胺（CA），形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧 化物酶标记的 Streptavidin 与*结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值，NF-κΒ p65 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 大鼠儿茶酚胺（CA）浓度。

大鼠elisa试剂盒组成

1、30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2、酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（240 ng/L） 0.5ml×1瓶
3、酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶

大鼠elisa试剂盒准备试剂与收集血样
1. 2. 收集标本：血清、血浆（EDTA） 、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存 48 小时； 更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。 标准品液配制：使用前加入 0.5ml 蒸馏水混匀，配成 20ng/ml 的溶液。设标准管 8 管，*管 加标本稀释液 900ul，第二至第八管加入标本稀释液 500ul。在*管中加入 20ng/ml 的标准品 溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul， 移至第二管。 如此反复作对倍稀释， 从第七管中吸出 500ul 弃去。第八管为空白对照。 10×标本稀释液用蒸馏水作 1:10 倍稀释（示例：1ml 浓稀释液+9ml 蒸馏水） 。 洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水） 将 450ul 标本稀释液加入到一支 1.5ml 进口聚丙烯管中,再加 10ul 血清或血浆标本。 加 20ul 1 N HCI,盖紧，上下混匀。2－8℃放置 60± 2 分钟。 加 20ul 1 N NaOH,盖紧，上下混匀。 即用，或放-20/-70℃保存 3 天。计算结果时乘以稀释倍数 50。 注意：不同的标本 NF-κB p65 （注意： κ 的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度） 的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度） 细胞培养上清或组织匀浆 10 倍稀释（410ul 的标本稀释液＋50ul 样本＋20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH）。

大鼠elisa试剂盒加样：

每孔各加入标准品或待测样品（已激活）100ul，将反应板充分混匀后置 37℃120 分钟。 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。 每孔中加入*抗体工作液 100ul。将反应板充分混匀后置 37℃60 分钟。 洗板：同前。 每孔加酶标抗体工作液 100ul。将反应板置 37℃30 分钟。 洗板：同前。 每孔加入底物工作液 100ul，置 37 ℃暗处反应 15 分钟。 每孔加入 100ul 终止液混匀。