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上海永叶生物科技有限公司
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阅读:528发布时间:2012-7-28
以下简单介绍用FACS分析检测跨膜型TNF。
1.材料
①含2%人血清,0.1%叠氮钠的PBS;
②FITC标记的TNF单克隆抗体;
③羊或兔抗TNF多克隆抗体及F1TC标记的羊抗兔IzC。
2.操作步骤
(1)单核细胞加或不加激活剂,37℃培养一定时间。
(2)2000rpm离心10min,弃上清。
(3)用含2%人血清/0.1%叠氮钠的PBS悬浮细胞。
(4)将105细胞厅L0口人圆底96孔培养板,并加FITC标记的TNF单抗冰上放置20min。如无FITC标记的TNF单抗,可按(5)~(7)步骤操作。
(5)加1:500稀释的兔抗TNF多抗,冰上放置20min。
(6)用PBS洗一次,以去除未结合的抗体。
(7)再加1:500稀释的FITC标记的羊抗兔ISC,置冰上20min。
(8)PBS洗4次后,用流式细胞仪分析荧光标记阳性细胞百分率及平均荧光强度。
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