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上海永叶生物科技有限公司
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阅读:757发布时间:2012-8-4
l.定义 56kD蛋白是大核糖核酸蛋白(InRNP)颗粒的成分之一。hRNP中的主要成分是富含脲嘧啶的小核糖核酸(snRNP),如U1、U2、U4/U6及U5snRNPs,其相应的自身抗体见于一些自身免疫性疾病。56kD蛋白序列是高度保守的、存在于转录、合成活跃的各种组织细胞中。
2.来源 由于细胞内存在大量丰富的InRNP颗粒,因而56kD蛋白来源丰富。以细胞核提取物进行蛋白质印迹(免疫印迹),可检测到肌炎患者血清中的56kD抗体。一些肌炎患者血清中通常仅含56kD抗体。
3.纯化方法 采用免疫亲和层析,可从富含InRNP的Hela细胞、Hep—2细胞核等提取物中纯化56kD蛋白。用于纯化56kD抗原的自身抗体可从56kD抗体阳性血清中制备。简要的步骤是用饱和硫酸铵沉淀血清蛋白,过DE52层析柱,获得的IgG与Sepharose 4B偶联制成亲和层析柱。核提取物溶于10mM Tris HCl pH7.9,0.5M NaCl,2mMPMSF中,上柱并用上述缓冲液充分洗涤,zui后改用0.2M醋酸洗脱蛋白,用1MK2HP04中和获得的蛋白,用蛋白质印迹法鉴定。
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