补体活化zui终形成补体终末复合物C5b-9。C5b-9存在于靶细胞膜上为MC5b-9，导致细胞膜攻击和损伤；C5b-9若存在于体液中则与S蛋白结合形成失活的SC5b-9。终末复合物的检测直接反映体内补体活化程度。
1．原理 补体C5-C9活化后，产生C5b-9复合物新生抗原。用抗C5b-9新生抗原的McAb包被酶标反应板，加入待检样本，然后依次加入亲和层析纯化的兔抗人C5b-9-IgC多克隆抗体、*标记的驴抗兔IgG、辣根过氧化物酶标记的*—亲合素复合物及底物邻苯二胺，反应后于酶标仪492nm处读取吸光度，其吸光度与C5b-9含量呈正相关。
2．主要试剂 ①洗涤液：20mmol/L Tfis含500mmol/L NaCl，0．05％Tween 20pH7．5；②稀释液：20mmol/L Tfis含150mmol NaCl，0．05％Tween 20，pH7．5；③*标记的驴抗兔IgC（Amershan Bratmscheig）；④亲合素—*标记的辣根过氧化物酶复合物（Amershan Braunscheig）；⑤封闭液为含0．3％Tween 20的洗涤液；⑥底物缓冲液：pH5．0醋酸缓冲液。按0．43mg/mL加入邻苯二胺和终浓度为0．02％的H202。
3．操作步骤
（1）抗体的包被：用pH9．4，0．05mol/L碳酸钠稀释抗C5b-9复合物新生抗原的McAb，浓度为2～3ug/mL。将稀释的McAb加入酶标板，100uL/孔，放人湿盒，20％16～24h。次日取出用洗涤液洗4次，每孔加封闭液100/uL，22％20rain，然后用洗涤液洗1次。
（2）待检样本的检测：待检样本用终浓度为10mmol/L EDTA抗凝，取血浆并将其稀释，加入包被有抗体的酶标板中，每孔100uL，放人湿盒37℃ 45min，取出用洗涤液洗4次，加入100uL亲和层析纯化的兔抗C5b-91gC多克隆抗体（1：1 000），37℃ 30min，每孔加洗涤液洗4次，加入100uL*标记的驴抗兔IgG（1：1 000），37℃ 30min，用洗涤液洗4次，加人100uL辣根过氧化物酶标记的亲合素—*复合物（1：1 000），37℃20rain，洗涤4次，每孔加底物液150ul，37℃10～15min，加入50uL 4mol/L H2S04终止反应，在酶标仪492nm处读取吸光度，根据标准曲线求出血浆中C5b-9的含量。每次试验都应做抗体和抗原对照。背景吸收值控制在0．04±0．025。
（3）ELISA C5b-9标准曲线的制作：将纯化的SC5b-9稀释为25ng/mL、lOOng/mL、400ng/mL、1 600ng/mL、6 400ng/mL 5个浓度；将MC5b-9 1．5ng/mL、6.25ng/mL、25ng/mL、lOOng/mL、400ng/mL 5个浓度，分别加入包被有抗体的酶标板中，随后操作同待检样本检测，然后以吸光度为纵坐标，SC5b-9、MC5b-9浓度为横坐标作图。本法zui低测定极限MC5b-9为3ng/mL；SC5b-9为20ng/mL。100名健康献血员中65人SC5b-9在100～250ng/mL，少数为600ng/mL，其余低于100ng/mL。
