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上海永叶生物科技有限公司
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阅读:872发布时间:2011-6-18
受病毒或细菌感染、贯通伤或钝挫伤、梗塞、免疫复合物沉着及针对组织的自身抗体形成等因素影响,都可导致组织损伤。在组织损伤急性期,机体除表现出损伤局部的炎症反应外,也常出现一些全身反应,如肝脏合成某些血浆蛋白显著增加。因此,急性反应期蛋白(acutephasicprotein,APP)是一组被称为“损伤诱发的肝脏产生的血清糖蛋白”,在组织损伤后迅速增加,并随损伤的恢复而下降,APP种类较多。临床上常用的是C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)、01酸性糖蛋白(ol—acid glucoprotein,o厂AGP),α1抗*(α1antitrypsin,α1AT),触珠蛋白(haptozlobin,HP),铜蓝蛋白(cemloplasmin,CP)等。新近发现,脂蛋白α(LPα)是一种zui敏感的急性时相蛋白,是一种比其他急性期反应蛋白更为敏感的炎症标志蛋白。
CRP是zui早发现的一种急性反应期蛋白,在炎症或组织破坏时明显升高,在炎症开始48h即可达到峰值,甚至可升高3 000倍。CRP这一特性在临床上具有非常重要的意义,特介绍如下。
检测CRP方法很多,敏感度高的如RIA、发光免疫测定(LIA)、ELISA法和荧光偏振免疫分析法等,并可用于定量检测。胶乳凝集试验与速率散射浊度法比较,具有高敏感性(97.7%)、特异性(98.04%)和准确性(98%),且简易、经济、快速,虽为定性试验,但可用滴度测定进一步得到半定量的结果。以下介绍易于推广、敏感度高、可作定量测定的ELISA法,以及简便易行的半定量胶乳凝集试验。
(一)ELISA法
1.操作步骤
(1)用zui适浓度抗CRP抗体包被聚苯乙烯微量板,每孔0。lmL,37~C1h后,4~C过夜。
(2)用洗涤液洗涤3次,每次3min(以下同)。
(3)于包被抗体孔中加稀释待测血清(1:5~1:10),每孔0.1mL,37T:2h,洗3次。
(4)各孔加HRP标记抗人CRP抗体各0.1mL,37~C2h,洗3次。
(5)各孔加底物溶液(OPD-H202)0。1mL,37T:反应30min。加2mol/LH2S040.05mL,终止反应。
(6)每块反应板上均应设标准品对照。将CRP标准参考品稀释成不同浓度后与待测血清同法进行测定,绘制标准曲线。
(7)于酶标仪上测492mn吸光度,根据标准曲线换算得待测血清中CRP含量。
2.正常参考值 ELISA法测得正常血清CRP含量为0.07—8。2rog/L;孕妇血清正常
上限为46.8m6/Lo由于测定方法的敏感度不同,所以CBP的正常值范围也不相同。
(二)胶乳凝集半定量试验
1.原理 血清标本与用抗CttP血清致敏的胶乳混和,如标本中含有足量CRP,即出现乳的凝集。用不同稀释度的血清标本进行试验,可以判断不同程度的阳性反应,从而可以达到半定量的目的。
2.操作步骤
(1)用*缓冲盐水将受检血清作1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64倍比稀释。
(2)用毛细吸管将各种稀释度的血清各加一滴于反应板的一系列格子中。
(3)分别加一滴ClIP胶乳试剂,用小搅棒或牙签从zui高稀释血清开始,分别混合每一格的液体。
(4)慢慢摇动玻板1—2min,肉眼观察,出现凝集者为阳性反应。显示凝集的zui高稀释度即为标本的CRP滴度。
3.临床意义 在细菌性炎症中CRP显著升高,病毒感染时CRP水平几乎无变化,因此,CRP常用于细菌性与非细菌性脑膜炎的鉴别诊断,并先于细菌培养得出结果。SLE患者易继发感染,其临床表现与SLE疾病时相似,血清CRP在SLE活动时无显著变化,但继发感染时明显升高,对两者的鉴别诊断有重要意义。风湿热在急性炎症期CRP几乎总是升高的,但在非活动期ORP降低,因此可用来监测该病的活动性。绝大部分急性心肌梗死病人均伴有CRP显著升高,且在所有急性反应期蛋白中,CRP升高出现zui早。在烧伤病人中,烧伤的面积、深度和严重程度与CRP水平有着一定的,测定CRP有助于估计预后以及选择去痂和植皮的zui适时间。器官移植术后的病人出现移植排斥时,CRP显著升高,因止C进行CRP的测定也具有重要意
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