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*A结合蛋白(CypA)三类Ig自身抗体的测定

阅读:620发布时间:2011-6-25

*A结合蛋白(cyclophilinA,CypA)是生物细胞胞浆中的一种结构高度保守的低分子量蛋白(18 000),具有肽酰脯酰顺反异构酶(pplase)活性,在细胞内蛋白质合成、折叠和转运过程中起重要作用。因*A(CsA)具有选择性免疫抑制作用而广泛用于防治器官移植排斥反应,其效应的发挥主要是通过细胞内受体CypA的存在而起作用的。CsA与CypA结合后,即可影响mRNA的转录和某些蛋白质的表达,抑制T细胞的增殖与细胞因子的分泌。虞伟等利用基因重组技术,克隆表达出人CypA产物作为包被抗原,建立了检测三类Ig抗体的间接ELISA方法,现将其方法简要介绍如下。

操作步骤 将重组人CypA(hcypA)抗原溶于pH9.6的0.05mol/LCBS缓冲液中,调整浓度至11ug/mL,包被聚苯乙烯反应板,100uL/孔,37℃ 1h后洗涤,加入l:50稀释的待测血清,同时没空白,阴性和阳性对照孔,43cC40min后洗涤,再分别加入HRP标记的抗人γαμ链抗体的F(ab’)2,43℃40min,洗后加底物(OPD-H202)溶液,37℃避光显色5min,用2mol/LH:S04终止反应,空白调零,于492nm波长测吸光度(A)值。
 


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