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上海永叶生物科技有限公司
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阅读:853发布时间:2011-6-28
某些神经系统综合征是由于恶性肿瘤的远隔影响所造成,称为神经系统副肿瘤综合征(paraneoplasticsyndromesofthenervoussystem,PNSNS)。近年来由于发现了特异性的神经元抗核抗体(Hu抗体),因而认为此病与自身免疫有关。Hu抗体实质上为多克隆IsC,能固定补体,可与中枢神经系统及周围神经系统中所有神经元胞核及小细胞肺癌细胞核起反应,但不与其他组织细胞(如脑胶质细胞,肝、肾等组织细胞)发生反应,并与SLE等结缔组织疾病所产生的非特异性抗核抗体有本质上的差别,因此,称为特异性神经元抗核抗体(Hu抗体)。采用免疫荧光、ELISA法即可测出患者血清中Hu抗体。陈齐鸣等(1996)报道采用*的亲合免疫细胞组织化学ABC法和免疫印迹技术检测PNSNS患者的Hu抗体,其敏感性和特异性显著增高。现介绍亲合免疫细胞组织化学ABC法检测Hu抗体。
1.操作步骤
(1)6/1m正常人大脑额叶、颞叶、肝脏、肾脏及Wistar大鼠的大脑、小脑的冰冻切片干燥10min。
(2)丙酮固定10min后用含0.3%H202、1%BSA的PBS处理10min,抑制内源性过氧化物酶。
(3)加10%羊血清/PBS封闭30min后,分别加稀释的血清、脑脊液或尿液标本在4℃冰箱过夜。
(4)PBS洗5min,更换3次,以下同。加适度稀释的*标记羊抗人IeC(第二抗体),37℃孵育15min。
(5)同上洗涤,加ABC复合物室温作用15min。
(6)同上洗涤,DAB-H202底物显色后,常规封片镜检。
2.结果显示
(1)PNSNS患者的血清、脑脊液及尿液中的Hu抗体与正常人和Wistar大鼠所有神经组织中的神经元胞核形成均匀染色,核仁阴性,但不与神经组织中的胶质细胞、肝脏及肾脏组织细胞发生反应,说明该法具有高度特异性。
(2)血清及脑脊液中Hu抗体的滴度zui高可达1:64 000及1:4 000,尿液中Hu抗体滴度达到1:200,说明该法敏感性很高。
(3)以免疫印迹技术测得17例患者血清中的抗体识别神经元胞核中蛋白抗原分子量为350-400kD。
3.临床意义 通常认为,IgC不能从肾小球滤过,尿中测出IgC型Hu抗体,可能是Hu抗体损害了肾小球,使其通透性增加所致。脑脊液Hu抗体滴度与血清中的抗体滴度无关联,提示可能有CNS中的局部合成。有76%(13/17)患者以PNSNS起病,并检出Hu抗体,尔后发现原发灶,说明Hu抗体的测定对于部分癌肿,特别是小细胞肺癌的早期诊断有实际临床意义。
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