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技术文章

寡核苷酸切除和脱保护

阅读:569发布时间:2011-9-19

寡核苷酸3,—OH和琥珀酰连接臂之间的酯键的切除在全自动合成仪上是自动进行的,但也可以按照下列方法手工完成,全部操作都在通风柜内进行。所需材料为:浓氨水溶液,带螺盖的小瓶(5m1),1.0ml气密性注射器,旋转蒸发器或快速真空干燥器。

具体操作步骤如下:
1)合成后,用氩气干燥合成柱。
2)干燥合成柱后,从仪器上将其取下。用lml浓氨水溶液充满注射器并将注射器接到柱的一端。将柱的另一端装上一luer接头和一针头,将氨水溶液注入柱中,直到*滴冒出针尖。此时,柱子内的固相载体应该*浸泡在氨水溶液中。
3)将针插入橡皮塞中使注射器密封,在室温下放置lh。
4)取下注射器针上的橡皮塞,将氨水溶液通过柱子压人螺盖的小瓶中,暂时拧上盖子,重复步骤l~4次。zui后拧紧有3次氨水洗涤液的小瓶子。
5)要完成碱基脱保护,将样品在55‘C下过夜。小瓶冷却到室温,取下盖子,全部脱保护的寡核苷酸转移到50ml的圆底烧瓶中,蒸发至干,为进一步纯化备用。


 


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