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碱性磷酸酶用于ELISA的标记用酶

阅读:494发布时间:2011-11-2

碱性磷酸酶为二聚体蛋白,是一种含锌的金属酶,每分子酶至少含2个Zn原子。酶上3类金属结合位点,即所谓的催化(A)、结构(B)和调节(C)位点,两个A位点的结合则只会导致一个亚单位的磷酸化,即负协作亚单位相互作用(negativecooperativesubunitinteraction),而当加入金属离子(例如Mg2+)结合B和C位点时,上述负协作亚单位相互作用即随之消除,2个亚单位都被磷酸化。每个亚单位Znz+结合于3个不同的*残基,其中至少1个位于A位点。

碱性磷酸酶用于ELISA必须注意的是含磷酸盐的缓冲液对其酶活性的抑制作用,因为在ELISA中所使用的温育和洗涤缓冲液一般均为磷酸盐缓冲液生理盐水(PBS),含有相对高浓度的磷离子(15retool/L),对碱性磷酸酶有很强的抑制作用,尽管zui后显色反应的底物在另一种缓冲液中,但前面PBS洗板所残留的PBS,足以抑制约一半的酶活性。因此如试剂盒标记用酶为碱性磷酸酶,则温育和洗涤缓冲液不能使用PBS溶液。


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