人类补体C2基因位于第6号染色体短臂的HLA区，与Bf紧密连锁。C2、Bf、C4共同构成补体单倍型，C2的缺乏可导致一些疾病的发生。C2的遗传多态性主要为C2*C（C：common）、C2*B（B：basic）、C2*A（A：acidic）、C2*QO（QO：Quantify Zero）四种同种异型。
聚丙烯酰胺等电聚焦及溶血覆盖检测C2遗传多态性
1．原理 等电聚焦是根据所测蛋白质等
电点的不同，将各类蛋白质分离开。C2等电点（p1）为5．5，通过等电聚焦电泳，C2条带可出现在两性电解质pH 5．2～5．7的范围内，继而加以溶血覆盖，C2条带区可出现透明溶血带，根据C2溶血带出现的区域，判别C2的同种异型。
2。所需试剂的配制
（1）Acryl sol A：牛磺酸33．30g、丙烯酰胺66．60g、双丙烯酰胺1．60g，加水至几，过滤，放棕色瓶，4℃保存。
（2）pH7．3VBS（5X）：*钠1．019g，NaCl 8．30g，先溶于150mL蒸馏水中，加HCl（1mol／L）3．46mL，zui后加蒸馏水至200mL。
（3）2％明胶：明胶2g，叠氮钠0．02g溶于100mL蒸馏水中，4℃保存。
（4）GVB2+（明胶*缓冲液）：VBS2+ （5X）20mL，0．03mol／L CaCl2 2mL，0.1mol／LMRCl：2mL，2％明胶10mL，加蒸馏水至100mL。
（5）GL-GVB2=：GVB2+ 1份与10％葡萄糖溶液1份混合。
（6）PB pH6．0，u=0．1：NaH2P04·2H20（MW 156．01）13．17g，Na2HP04·12H20（MW358．16）1．86g，加水至1L。
（7）PBSpH6．0：0．85％NaCl 980mL，PBpH6．0／l：0．1m20mL。
（8）5X 10—5mol／L 12溶液：先配制10-2mol 12溶液：称取8．3g KI，0．25g 12，加4mLpH6．0,u=0。1的PBS，待I2溶解后，再加PBSl00mL。取10-2mol l2 5mL加PBS 995mL。
（9）0．2mol磷酸：取1．35mL磷酸』口水至100mL。
（10）0．2mol乙醇胺：取乙醇胺1．22mL，加蒸馏水至100mL。
（11）0．001％核黄素：称取核黄素10mg，加蒸馏水至1L，储于棕色瓶中，4~C冷藏。
（12）1％曲拉通（冷却用）：取曲拉通10mL，加蒸馏水990mL。
（13）两性电解质（ampholine，LKB）pH5—8和pH3．5～10两种。
（14）无C2人血清（R2）的制备：将3份以上正常人血清混合，1:100稀释的正常人血清，C2将不能发挥作用。
3．操作步骤
（1）制胶：将Acryl SolA 40raL,0．001％核黄素10．8mL，pH5—8的两性电解质2mL、pH3．5～10的两性电解质0．4mL混合后，倒入15X10cm，厚度为lmm的两块玻璃板中（中间夹有lmm厚的有机玻璃框，四周用铗子夹住，不漏水），放日光下或两只40W日光灯下聚胶2—5m／n，然后揭掉一块玻璃板。
（2）等电聚焦电泳：①将滤纸裁成宽0，65cm长15cm的纸条，叠成四层作为电极条，再将滤纸裁成宽0．5cm，长1cm的纸条，单层作为加样条；②将凝胶板放在冷却循环槽上，凝胶板与冷却板之间滴加1％的曲拉通，注意不能有气泡。然后将电极条分别用0．2m01／L磷酸溶液和0．2mol／L乙醇胺浸湿。正极放置经0．2moltL磷酸溶液浸湿的滤纸条，负极放
置经0．2mol／L乙醇胺浸湿的滤纸条；③打开冷却循环泵（LKB MulfiphorⅡ成套电泳系统），4℃循环冷却，将电极压在电极条上，接通电源100～450V预电泳30rain；④将加样条贴在凝胶上，每个加样条加15／~L待测EDTA抗凝血浆或血清，450V电泳30min，取掉加样条，450V电泳15—18h；⑤电泳完毕，取出凝胶板放5X10—5mol／Lh溶液中浸泡10min取出，然后用溶血覆盖技术进行鉴定，方法同C4溶血覆盖，不同的是C4溶血覆盖用的是R4豚鼠血清，C2溶血覆盖用的是R2人血清。
