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上海永叶生物科技有限公司
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阅读:766发布时间:2012-4-14
(1)淋巴细胞分层液分离外周血细胞,弃去上层血浆和淋巴细胞。
(2)将沉淀的红细胞和白细胞悬浮于2.5%明胶层上(用0.9%NaCl配制),37C孵育30min。
(3)收集富含PMNL的上清,用0.83%N1lCl裂解残存红细胞,然后在2%BSA-PBS液内低速离心3次,以除去污染的血小板。收集PMNL后悬浮于无Ca2+、Mg2+的PBS液中。
(4)待测样本溶于*PBS液中(PBS内含0.1%BSA,0.9mmol/LCaCl2,0.49mmol/LMgCl2),测定前,上述细胞悬液用细胞松弛霉素B(5ug/mL)处理,然后加入待测样本,共孵育30min,离心收获上清测髓过氧化物酶活性(加底物如邻苯二胺,2mol/L H2S04终止反应,测OD值)。
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