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上海永叶生物科技有限公司
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阅读:684发布时间:2012-5-26
IL-4能促进B细胞膜表面CD23分子表达,一些BurkittB淋巴细胞瘤株(如Jijoy细胞)未受刺激时,CD23表达水平很低,经IL-4刺激后,CD23的表达呈剂量依赖性增加。用抗CD23单抗间接免疫荧光法染色,可检测人IL-4活性。
(1)将5X105/mL的Jiioy细胞培养于含10%FCS的RPMI-1640培养液中。
(2)取对数生长期细胞,用新鲜培养液将细胞配成5X 105/mL,接种于24孔板中,lmL/孔。分别加待测标本及标准IL-4(不同稀释度),并设阴性对照,培养48~72h。
(3)洗细胞2次,以106—107/mL浓度的细胞重悬于含1%BSA,2mmoL/L叠氮钠的PBS中。将细胞转人Falcon分析管中,离心弃PBS,加100~L抗CD23单抗(5—10btS/mL),置冰浴中15~30rain,用上述PBS洗2次。
(4)加适当稀释的FITC标记的羊抗鼠IgC,置冰浴15~30rain,同上洗细胞,重悬细胞于含2mmol/mL叠氮钠的PBS中。
(5)用流式细胞仪分析CD23分子的表达,以阳性细胞百分率表示,并计算IL-4活性单位;或用荧光显微镜观察CD23分子的表达。
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