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间接放射免疫法检测跨膜型肿瘤坏死因子(TNF)

阅读:525发布时间:2012-7-7

1. 材料
① 1%多聚甲醛;
② 3%牛血清白蛋白(BSA),溶于PBS;
③ 兔抗TNF的抗血清;
④ “I标记的驴抗兔IgC抗体。

2.操作步骤
(1)将105巨噬细胞/fL用1%多聚甲醛固定于PVC板。
(2)用PBS洗去多余甲醛。
(3)加3%BSA,37cC孵育1h,以封闭非特异性结合位点。
(4)弃上清,加1:50稀释的兔抗TNF血清,以免疫前兔血清为对照,37~C孵育45min。
(5)用PBS洗三次,以去除未结合的抗体。
(6)加入125I标记的驴抗兔IgC抗体(2 000cpm/孔),37C,孵育45min。
(7)用PBS充分洗板后,卜计数仪测量放射活性。


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