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ELISA实验操作中常见问题--显色和比色

阅读:460发布时间:2012-10-30

ELISA实验操作中常见问题--显色和比色:

    TMB HRP 作用后,约40 分钟显色达,随即逐渐减弱,至小时后即可*消退至无色。TMB 的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24 小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。酶标比色仪简称酶标仪,通常指于测读ELISA 结果吸光度的光度计。酶标仪的主要性能指标有:测读速度、读数的准确性、重复性、度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可到0.001,准确性为±1%,重复性达0.5%。酶标仪不应安置在阳光或强光照射下,操作时室温宜在15 -30℃ ,使用前先预热仪器 15-30 分钟,测读结果更稳定。

    

 

    测读 值时,要选用产物的敏感吸收峰,如OPD492nm 波长。有的酶标仪可用双波长式测读,即每孔先后测读两次,*次在zui适波长(W1),第二次在不敏感波长(W2),两次测定间不 移动ELISA 板的位置,zui终测得的值为两者之差(W1-W2)。双波长式测读可减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

    

    肉眼判断结果时,显色浅不易观察,影响结果的准确性,必须使用酶标仪检测,以保结果一致性。

 

 

人elisa试剂盒


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