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ELISA实验操作中常见问题--显色和比色

阅读：537发布时间：2012-10-30

ELISA实验操作中常见问题--显色和比色：

    TMB 经HRP 作用后，约40 分钟显色达，随即逐渐减弱，至2 小时后即可*消退至无色。TMB 的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24 小时）不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长（450nm）测读吸光值。酶标比色仪简称酶标仪，通常指于测读ELISA 结果吸光度的光度计。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可到0.001，准确性为±1%，重复性达0.5%。酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15 -30℃ ，使用前先预热仪器 15-30 分钟，测读结果更稳定。

    

 

    测读 A 值时，要选用产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm 波长。有的酶标仪可用双波长式测读，即每孔先后测读两次，*次在zui适波长（W1），第二次在不敏感波长（W2），两次测定间不 移动ELISA 板的位置，zui终测得的A 值为两者之差（W1-W2）。双波长式测读可减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

    

    肉眼判断结果时，显色浅不易观察，影响结果的准确性，必须使用酶标仪检测，以保结果一致性。

 

 

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