牛肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒使用注意事项
检测范围： 96T
8ng/L - 240ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中兔肿瘤坏死因子α（TNF α）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛肿瘤坏死因子α（TNF α）水平。用纯化的牛肿瘤坏死因子α（TNF α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF α），再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF α）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛肿瘤坏死因子α（TNF α）浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（480ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
| 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 240ng/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 120ng/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 60ng/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 30ng/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 15ng/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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