当前位置:上海逸峰生物科技有限公司>>公司动态>>Science:基因表达分析新技术(一)
科学家们为了能深入了解特异性基因表达,发展了许多实验技术,比如芯片技术,PCR,高通量测序等,但是要想得到的结果,仍然依赖于实验操作人员对于技术掌握的熟练程度。而且随着基因表达研究越来越多,为了确保公布的结果的性,对于相关分析也越来越严格。不过所幸目前也有了更多基因表达分析相关的产品,这些产品带来的新技术也许能帮助我们解决难题。
芯片技术
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如今进行基因表达分析zui大的挑战之一就是如何选择实验方法,即使是采用传统芯片技术来分析基因表达,现在也有了更多选择,比如安捷伦的高密度SurePrint G3表达芯片系统,这一芯片所包含的内容是之前安捷伦同类产品的4倍,也是市场上将编码和非编码RNA整合在单张芯片上的产品。
这一系统芯片包含有上百万核苷酸探针,而且包含有长链非编码RNAlincRNA探针和mRNA探针,近年来的研究显示长链非编码RNA在多个方面具有重要的作用,包括X染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录激活,转录干扰,核内运输等多种重要的调控过程。SurePrint G3表达芯片系统整合了lincRNA探针和mRNA探针,帮助研究人员在一张芯片上实现lincRNA和蛋白编码基因的同步检测,并通过分析二者之间的相互关系,预测大分子非编码RNA可能的生物学功能。SurePrint G3芯片系统提供目录版和定制版。客户可使用安捷伦*的eArray 在线工具设计定制的微阵列芯片。定制方案高度灵活,用户可以选择单片八阵列的芯片格式,在每个阵列上设计六万个探针;或者选择在单张微阵列芯片上设计高达一百万个探针。用户也可以将针对人类和病原体检测的探针放到同一张芯片上,一次进行多个实验,实现高通量和低成本。
同时为了能满足这些产品的高性能要求,今年安捷伦也推出了新型的芯片扫描仪:SureScan微阵列扫描仪,这一扫描仪具有高灵敏度,宽动态范围,超高分辨率等性能,而且简化了工作流程,允许研究者在仪器运行时不断地加载新的微阵列芯片。SureScan具有*的动态自动对焦系统和极低的检测限(低至0.01荧光团/平方微米),能确保得到极其灵敏的检测结果,从而帮助研究人员同时能掌握高质量的高信号值以及低信号值的数据。
说到芯片技术,当然不能少了的Affymetrix公司,这家公司推出的新型人类转录组和剪接点芯片(Human Transcriptome and Splice Junction Array)包含了大约七百万转录本,这覆盖了99%的人类基因,据称来自斯坦福大学的研究人员进行的一项比较研究表明,这种芯片在基因表达谱研究方面,与RNA测序同样灵敏,而且前者也更快速,和划算。
今年Affymetrix公司还新推出了18种全新的芯片,可以用于模式生物及应用型研究生物的全转录组分析,这一系列名为Affymetrix® Gene 1.1 ST Array Strips的芯片是一种强大的工具,能让研究人员更全面地了解基因表达的整体变化。
模式生物及应用型研究生物是当今生命科学研究中增长zui快的领域之一,随着新一代测序和全基因组关联研究的推动,这些生物的研究热度持续升温。Affymetrix® Gene 1.1 ST Array Strips系列目前有18个产品,覆盖拟南芥、水稻、斑马鱼、牛、猪、犬等物种。这些系列芯片具有*的芯片设计以及高探针覆盖度。探针分布在全长基因内,而不像其他芯片那样只有一个位于3’端的探针,因此能更全面更准确地了解整体基因表达。全转录组分析让研究人员能够检测某一基因的多个转录异构体,包括剪接变体、未加A的转录本,以及截短的转录本等。
Affymetrix公司也关注到基因表达标记在临床分子病理学分析中的应用,他们计划推出基于多重基因表达标记的临床设备,目前这一计划聚焦于癌症预后方面的应用,这是Affymetrix公司朝着临床应用方面迈进的一大步。
Pathwork Tissue of Origin Test是Affymetrix公司临床应用推向市场的产品,这一基因表达平台通过了FDA批准,可利用肿瘤样品中提取的RNA来分析超过2000种基因,从而了解肿瘤的特征,诊断肿瘤的组织来源。
许多研究人员希望了解基因标记和生物标记亚群,一些实验方法能帮助到他们,比如多重PCR(multiplex PCR),这是一种在一个PCR体系中同时扩增多个基因的方法,主要包含四个步骤:提取总RNA,逆转录成cDNA,多重PCR扩增,以及片段分离。这种技术多用于病原微生物的同时检测或鉴定,以及病原微生物,某些遗传病及癌基因的分型鉴定。
Qiagen今年推出了升级版Multiplex PCR Plus Kit,这款产品能快速简单的完成多重分析,而且无需优化。系统中的HotStarTaq DNA酶能保证PCR反应的高度特异性和高敏感度,并将热启动时间缩短至5分钟,获得结果更迅速。
另外这一试剂盒中的具有QIAGEN的MP因子能确保不同引物/模板间的特异性结合,真正实现的多重PCR扩增,除此之外Q-Solution有助于提高高GC含量等困难模板的扩增效率,CoreLoad Dye使得PCR反应后的电泳分析更方便。
除此之外,其*的PCR buffer体系也有助于成功的多重PCR,如果配合使用QIAxcel全自动核酸片段分析仪,就能更快、更高分辨率的进行多重PCR产物电泳分析。
多重PCR需要多条引物,而要确认扩增的特异性,就得先保证引物的靶标特异性,在这方面,Beckman Coulte公司推出了一款引物设计软件:eXpress Designer,这一软件能配合Beckman本身的几个PCR产品,完成,特异性强的设计。
来源:生物通
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