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472次pUC-T TA载体是一种克隆PCR产物的载体,它是由pUC18载体在EcoR V
酶切位点处切开,在两侧的3′端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在 PCR
产物的3′端添加一个A,它可以与pUC-T 3′端的T互补连接,因此可大大提高PCR产物的
连接和克隆效率。
试剂盒中配备率的T4 DNA Ligase和为快速DNA连接优化的2×Quick Ligation
Reaction Buffer。连接效率相当于用T4 DNA Ligase 进行常规连接1小时。带有插入片
段的重组子可根据α互补原理,进行蓝白斑筛选,判断载体中有无外源基因的插入。克
隆后可以用BcaBEST Sequencing Primers和 M13通用引物对PCR产物进行测序。
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