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上海川翔生物科技有限公司
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阅读：495发布时间：2011-2-22
产品名称：人促卵泡刺激激素（FSH）
酶免疫ELISA检测试剂盒
方法：ELISA 、定量
规格：96T
一、用途
本试剂盒用于人血清中促卵泡刺激素（FSH）浓度的定量检测。
二、概述及检测原理
促卵泡激素（FSH）和黄体激素（LH）与性腺组织的生长和生殖活动密切相关。性腺组织中合成和分泌的雄性和雌性性激素通过负反馈控制着FSH和LH的循环水平。
FSH是垂体前叶的嗜碱细胞分泌的糖蛋白。促性腺素释放激素（GnRH）由下丘脑产生，控制着垂体前叶中FSH的释放。象其它糖蛋白如LH、TSH和HCG一样，FSH是由α和β亚基组成的。这类激素的α亚基的结构是很相似的，因此，这些激素的生物学和免疫学特性的区别取决于其*的β亚基。
在女性体内，FSH通过作用于颗粒细胞上的受体，刺激着卵巢卵泡的发育和成熟，同时促进了卵泡类固醇和LH的生成。生成的LH结合到膜细胞上，进一步刺激类固醇的生成。卵巢内的雌二醇量随着卵泡的成熟而增加，因此，这促进FSH受体的活性和FSH卵泡的结合能力。所以，FSH、LH和雌二醇在维持女性卵巢复原和成熟方面密切相关。
在绝经或卵巢切除后，以及早熟卵巢的衰退期，FSH的水平升高。FSH的水平由雌激素通过负反馈进行调控。FSH和LH，或者FSH和雌激素之间的关系一旦失衡，有可能引起神经性厌食和多囊卵巢的疾病。当随机的FSH浓度超过40mIU/ml时，则表明卵巢衰退，尽管也有些明显的例外。
在男性体内，生精小管的发育和生精作用的保持都是由FSH调控的。不过，雄激素并不象雌激素一样会降低FSH水平。因此，证明负反馈关系只能通过血清LH。
不太清楚是什么原因，缺精子或少精子的男性体内的FSH的水平经常提升。经放射性免疫测定，受试者的肿瘤通常会降低血清FSH浓度，但却提高了LH的水平。会引起与受试者肿瘤分泌的类似人绒毛膜*（hCG）物质发生交叉反应。
男性体内高水平的FSH会在睾丸衰退和克兰费尔特氏综合症的初期出现。FSH的浓度在饥饿、肾衰竭、甲状腺机能亢进和肝硬化时也会有所提高。
BioCheck FSH EIA检测的原理是基于固相酶联免疫吸附检测。该检测系统是利用了作为固相（微孔板）固定剂的鼠单克隆抗α-FSH抗体，以及抗体酶（辣根过氧化物酶）结合物溶液中的鼠单克隆抗β-FSH抗体。被测样品同时与两个抗体发生反应致使FSH分子夹在固相和酶联抗体之间。室温下温育45分钟后，用去离子水或蒸馏水洗掉未结合的标记抗体。然后加入四甲基联苯胺（TMB），在室温下温育20分钟，溶液逐渐变蓝。加入HCL后，终止颜色变化，溶液zui终呈黄色。再用分光光度计在450nm波长下测定黄色溶液的吸光值，FSH浓度与检测样品色度成正比关系。
二、试剂盒的组成
1．包被有抗体的微孔板：96孔，1块。
2．参照标准品：1套（0，5，15，50，100和200mIU/mL）。
3．酶联试剂：13mL。
4．TMB试剂（一步）：11mL。
5．终止液（1N HCL）：11mL。
三、自备材料
1．精密吸管50µL，100µL，200µL和1.0mL。
2．一次性吸头。
3．蒸馏水。
4．涡旋混合器或等同物。
5．吸水纸或纸巾。
6．坐标纸。
7．酶标仪。
四、样品的采集和准备
血清由全血样品制备，用于本试剂盒的血清样品须无任何添加物。
五、试剂盒的保存和所用仪器
未启封的试剂盒须保存在2~8℃下；微孔板放在有干燥剂的密封袋里，以尽量减少其在潮湿空气中的暴露；已启封的试剂盒在上述保存条件下，在有效期内可保持稳定。用酶标仪在450nm处测定吸收值时，要求谱宽≤l0nm，光密度值（O.D.）在0~2之间或更大些。
六、试剂的准备
1．在检测前要使所有试剂达到室温（18~25℃，下同）。
2．用1.0mL蒸馏水溶解每个冻干的标准品（zui少需20分钟）。已溶解的标准品须在2~8℃下密封保存。
七、检测步骤
1．将所需数量的微孔固定在微孔架上，标注加样顺序，制作数据表。
2．分别吸取50µL标准品、样品加入到相应的微孔中。建议：双份设置标准品、样品。
3．取100µL酶联试剂分别加入到每个微孔中。
4．充分混合30秒钟（此步至关重要）。
5．室温（18~25℃）温育约45分钟。
6．翻转微孔板，弃掉温育混合物。
7．用蒸馏水冲洗微孔5次（请勿使用自来水）。
8．在吸水纸或纸巾上扣击微孔以*除去微孔中残存的水滴。
9．向每个微孔中分别加入100µL的TMB试剂，轻轻混合10秒钟。
10．室温暗处温育20分钟。
11．向每个微孔加入100µL终止液（1N HCL）终止反应。
12．轻轻地混合30秒钟（确保蓝色全部变成黄色，此步至关重要）。
13．用酶标仪在450m处于15分钟内读出光密度值。
注意：冲洗是关键步骤，不适当的冲洗会导致度不准和吸收值读数错误地升高。
八、结果计算
在酶标仪上读出参照标准品、样品的平均吸收值（A450）。以每个参照标准品的平均吸收值作纵轴（Y），其相应浓度值（mIU/mL）作横轴（X），在坐标纸上绘制出标准曲线。根据每个样品的平均吸收植在标准曲线上找出相应的FSH浓度值（mIU/mL）。
九、典型曲线实例
在450nm处测得的光密度值在Y轴上，其相应的FSH浓度值在X轴上，从而得出典型的标准曲线。此标准曲线仅用于示例，不能用于计算未知样品。每个使用者应根据自己的数据制作出标准曲线。
| FSH（mIU/mL） | Absorbance（450nm） |
| 0 | 0.058 |
| 5 | 0.133 |
| 15 | 0.265 |
| 50 | 0.782 |
| 100 | 1.483 |
| 200 | 2.885 |
十、期望值和灵敏度
男性（100名）平均正常值：1lmIU/mL；
女性（150名）平均正常值：12mIU/mL；
绝经后女性（60名）平均正常值：94mIUI/mL；
怀孕期女性（60名）平均正常值：1.0mIU/mL；
测得FSHzui低浓度为2.5mIU/mL。
十一、单位换算：1ng/ml=4.2mIU/ml的FSH
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