佳和试剂-食品中亚硝酸盐检测方法介绍
亚硝酸盐是许多国家允许使用的食品添加剂，不但能使食品的色泽鲜艳，还能防腐。但长期大量食用含有亚硝酸盐的食物，可对人体的健康构成潜在的威胁，可引起食管癌、胃癌、肝癌和大肠癌。此外许多研究：表明亚硝酸盐可能与人类先天畸形的发生有关，特别是中枢神经系统先天畸形高发的重要原因之一。而中国是出生缺陷高发国家，中国北方广大地区是属于世界上神经管畸形发生率zui高的地区，而这些高发地区与该地区食物中较高的亚硝酸盐含量密切相关。
1光度法
1.1紫外可见光度法
Griess反应分析法是目前国外普遍使用也是zui早发现的检测亚硝酸盐的方法。Griess反应分析法是在酸性条件下，将NO2-与Griess试剂中的对氨基苯黄酸反应，生成重氨盐，然后再与N－1－萘基－乙二胺偶联生成红色染料.该染料在543nm处有zui大吸收，可以用光度法进行测定。Griess法的检测限可达到0.02-2Um,而且具有很高的灵敏度。然而该反应所需试剂本身都是毒性很大的致癌物质，并且显色反应的稳定性比较差，同时测定Cu2＋、Fe2＋、S2－、I－等都有干扰。该方法的优点是回收率高，重现性好，而且操作简便，适应于生产单位常规测定，但在复杂介质中测定会受到影响。
1.2荧光光度法
该法是通过检测各种能与亚硝酸根反应，形成一种具有荧光发光性质的化合物，来检测亚硝酸盐。据Lapat等报道2－氨基－4－氯－6－黄酸*和4－氨基荧光素均能与亚硝酸根反应，生成具有荧光发光性质的化合物。该化合物可在608nm和518nm下有强烈的荧光发光信号。该方法的优点是灵敏度高、取样量少、线性范围宽，可以有效地检测NO2-且不受检测液本身颜色和浑浊的干扰，也不受样品稀释度的影响，但是操作较为复杂，对环境因素敏感，适用范围窄。
2色谱法
2.1液相色谱法
该法是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，各成分在柱内被分离后，进入检测器进行检测，从而达到对试样的分析。液相色谱法具有、高速、灵敏度高、操作方便等优点。吴富忠等建立了一种蔬菜、水果及其制品中亚硝酸盐与硝酸盐的液相色谱同时测定的方法。该方法通过样品中亚硝酸盐与硝酸盐用超纯水浸提，经活性炭脱色后过滤滤液，经0.45um水相膜过滤后进样，在SAX色谱柱上，以0.01mol/L磷酸二氢钾为流动相进行分离，205nm检测外标法定量。该方法zui低检出量分别是亚硝酸盐氮0.1mg/kg，硝酸盐氮0.07mg/kg.样品加标回收率，亚硝酸盐为91-101.9％，硝酸盐为94.7-106%，RSD＜５％。该方法速度快，干扰少，结果准确，操作较简单，灵敏度高，可用于蔬菜、水果及其制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定。
2.2离子色谱法
该法是液相色谱法的一种，主要是将试样进行沉淀，再采取相应方法进行提取和净化，利用离子交换原理，连续对各种离子进行定量和定性的分析。蔡荟梅等建立了一种离子色谱法测定茶叶中硝酸盐和亚硝酸盐的分析方法。该方法是将样品通过超声提取后用PVPP吸附和固相萃取柱净化的方法进行前处理，经高容量阴离子交换柱分离，用抑制型电导检测器进行检测。该方法样品中硝酸盐和亚硝酸盐的回收率范围分别为88.6-107.5％和89.3-101.2％，相对标准偏差RSD为1.67％和1.13％.该方法测定硝酸根和亚硝酸根具有操作简便、准确性高、测定快捷的优点。
3毛细管电泳法
与上述方法相比，毛细管电泳法的突出优势在于可以实现自动化控制的快速、同时检测并且试剂用量比较少，分析化合物种类广泛。建立了一种可以同时测定硝酸根亚硝酸根和草酸根的新型毛细电泳法。该方法采用烙融石英毛细管柱作为分离通道，以50um磷酸盐作为运行缓冲液，毛细管柱温25℃，运行电压25kＶ，检测波长214nm，进样压力3.5kPa，外标法定量测定。该方法亚硝酸盐、硝酸盐和草酸盐的检测限分别为0.8，,0.3,4.5mg/Ｌ，相关系数均大于0.999。该方法适用于测定蔬菜硝酸根、亚硝酸根和草酸根的含量。
4电化学传感法
4.1电位型传感器
电位型传感器是将溶解在电解质溶液中的离子作用于离子电极而产生的电动势作为检测对象，从而实现对离子的检测。目前研究zui多的是离子选择性电极，它能以电极电位形式指示溶液中特定离子的活度。因其具有结构简单、灵敏度好、选择性高、响应速度快、易于携带等特点，可以有效地检测低浓度的亚硝酸盐。从早期的PVC膜到现在广泛使用的TDANr膜、TDAN膜均可以作为离子交换膜，与可作为增塑剂的二丁基邻苯二甲酸盐，o－硝基苯辛基醚结合使用可以制得性能优良的亚硝酸根离子选择性电极。
4.2电流型传感器
电流型传感器是保持电极和电解质溶液的界面为一恒定电位，将被测物质直接氧化或者还原检测流过外电路的电流从而实现对亚硝酸盐的检测。早在20世纪初人们便广泛地研究不同材料的电极对亚硝酸根的响应，如铜电极、铂电极、金电极、银电极、玻碳电极、铅电极等等。但由于在这些裸电极上电子传递速度慢，氧化亚硝酸根所需的过电势较高，大大影响了传感器的选择性和灵敏度。
5展望
食品中亚硝酸盐的检测方法种类繁多，各有利弊。电化学传感法具有更广阔的发展前景，因为它不仅具有仪器简单，操作方便，分析速度快等优点，而且具有灵敏度高，便于与计算机联机自动化等特点。它不受检测溶液颜色的影响，克服了光度法的一些不足，且稳定性较好，加之新型纳米复合材料的修饰使亚硝酸盐电极的电流响应成千上万倍的提高，还有酶的修饰显著地提高了电极的选择性，增强了其传感器的综合性能。但目前这些电化学传感器应用在测定亚硝酸根的研究还处在探索改进阶段，测量食品中的亚硝酸盐电化学传感器的研究现在还存在线性范围窄、离子干扰等问题，尤其是化学修饰电极的研究还处在试验阶段。相信通过科学工作者的努力，深入研究电化学传感器测定亚硝酸根的机理，将会研究出更多选择性更好，检测精密度和准确度更高的电化学传感器。
