培养基EB细胞体外分化胚状体形成的特点

培养基EB细胞体外分化胚状体形成的特点

使用细菌培养基皿去除LIF后胚状体的形成需要4天。

　　1．分散纯化细胞（参见上面的细胞传代部分）

　　2．纯化2小时后将细胞转入含有ES培养基的50ml Falcon管中，计数细胞取适量体积放入15ml管中离心3分钟。

　　3．用2mlEB培养基重悬细胞，吹打至少10次制成单细胞悬液

　　4．一个15cm的细菌培养皿接种4～5×106个细胞（1个*融合的组织培养皿通常足以接种4个同样规格的细菌培养皿）。

Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857)  磷酸化血小板源性生长因子受体α/β抗体    Multi-class antibodies    规格：     0.1ml
Anti-PDGF Receptor beta/PDGF-R-B  血小板源性生长因子受体-B抗体    Multi-class antibodies    规格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009)  磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体    Multi-class antibodies    规格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021)  磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体    Multi-class antibodies    规格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr740)  磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体    Multi-class antibodies    规格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)  磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体    Multi-class antibodies    规格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771)  磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体    Multi-class antibodies    规格：     0.1ml

　　5．2天后更换培养基

　　将胚状体转入锥形管中放置3～5分钟使细胞沉降。弃去上清，将细胞重悬于新鲜培养基并接种在新的细菌培养皿中。

　　6．用EB培养基培养的第4天将细胞转入没有包被的组织培养皿中（这即是细胞的移植步骤）。1个组织培养皿之中放置1个细菌培养皿，在进行第3步之前一天将胚状体黏附在同样规格的培养板上。

　　形成胚状体需要4天时间。在EB培养基中再培养1天使胚状体粘附在组织培养皿的表面。这一天被认为是第2步和第3步的分界。