化学发光免疫测定分类介绍

化学发光免疫测定分类介绍

    elisa试剂盒化学发光免疫测定（chemiluminesent immunoassay，CLIA）是免疫测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后发展的一项新兴测定技术。其基本原理是将化学发光系统与免疫反应相结合，以检测样本中的抗原或抗体，由于它既具有免疫反应的高度特异性，又具有发光反应的高敏感性，且对环境公害小，因此近年来已被国内外临床实验室及科研单位，广泛应用于各种激素、特种蛋白及药物的监测和分析。

    化学发光分析技术根据其标记物的不同可大致分为3大类：化学发光酶免疫测定、化学发光标记免疫测定、电化学发光免疫测定。

    化学发光酶免疫测定（chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA）从标记物性质来看应属酶免疫测定。CLEIA测定中的两次抗原抗体反应步骤均与酶免疫测定相同，仅zui后一步酶反应所用的底物为发光剂而非显色剂。CLEIA中常用的两种标记酶是HRP和ALP，其原理如下。

（一）HRP标记的CLEIA
    elisa试剂盒HRP标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺或其衍生物。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，通常以pH8．6的0．1mol／LTrig缓冲液作底物液，当HRP与鲁米诺在碱性环境下发生氧化反应时，鲁米诺将能量转移并zui终以发射光子的形式释放，而光的强度与被测物的浓度成正比；此外，HRP催化鲁米诺氧化的反应可被某些酚试剂（如邻碘酚）或萤火虫荧光素酶等加强。加强剂的作用是增强发光和延长发光时间，由此可提高检测的敏感度。

（二）ALP标记的CLEIA
    在以ALP为标记酶的CLEIA中，应用的底物一般为adamantyl dioxetase phosphate及其衍生物如PPD等。当ALP与底物相互作用时，ALP使底物由能量基态转变为激发态，当非稳态的底物以光子形式将能量转移，并回到基态时，其发光的强度则与被测物的浓度成正比，因此测定反应产物的发光强度即可获得被测物的浓度。