亲和组织化学法
? 是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础。
? 这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位。
*—抗*染色法
【原理】
? *(biotin)又称维生素H,是一种小分子维生素,分子量为244,是转氨甲酰基化过程中的辅酶。
? 抗*(avidin),又称卵白素或亲和素,是一种分子量为67000的碱性蛋白,对*具有很强的亲和力,比抗原抗体间的亲和力要高出100万倍。它由4个亚基组成,每个亚基都有*的结合位点。
? 两者均可与抗体等大分子生物活性物质相偶联,又可被酶类等多种示踪物所标记,形成*-抗*系统。
– 该系统一端偶联大分子生物反应体系,另一端连结标记物,后者加入酶的底物,产生颜色反应。
(1)标记抗*—*法(labelled avidin-biotin method, LAB):分为直接法和间接法。
? 直接法
用*标记*抗体,与抗原结合;酶标记抗*,与*结合,然后进行酶呈色反应。
? 间接法
用*标记二抗,酶标记抗*,先用*抗体与组织抗原结合,再将第二抗体与*抗体相连结,zui后进行呈色反应。
(2)桥抗*一*法(bridge avidin-biotin method,BRAB)
– 此法是用*分别标记抗体和酶,以抗*为桥,把二者连接起来,进行呈色反应。
(3) 抗*-*-过氧化物酶法