四种酵母菌实验步骤

实验步骤

一、酵母菌糖发酵试验

1)   糖发酵基础液配制好后，按培养液容量的1%加入糖，分装于杜氏发酵管中（培养液的高度约为4-5厘米），再在试管内加入倒置的小玻管（约0.4×2.0－2.5厘米）一支。每种糖设三个重复管，<121℃>高压灭菌15分钟。细胞
2)   将酵母分别接入上述各发酵管中，置<30℃>下培养48-72小时，另以不接种者作对照
3)   如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气，则必先产酸，并在杜氏小管顶端出现气泡。
4)   结果记录。以“ "表示产酸，“<0">表示产气，“＋"表示产酸产气，“－"表示无变化，“碱"表示产碱。 

二、酵母菌碳源同化试验
生长图谱法
1)   无碳培养基内加入2%的水洗琼脂，融化后冷却至45<-50℃>，到至平板。
2)   接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内，搅匀后倒入上述未凝平板内，摇匀待凝。
3)   皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记。
4)   用不锈钢匙，按标记加入相应的米粒大小的碳源，并以葡萄糖作对照。
5)   <28℃>下培养24-48小时后观察结果。

三、酵母菌氮源同化试验  

1、液体试管法

方法同二，以被测试的氮源代替碳源，不加任何氮源作空白对照。

2、生长图谱法

方法同二，以被测试的氮源代替碳源，不加任何氮化物作空白对照。

3、结果观察

1）液体试管中溶液pH值的变化。

2）生长图谱中测量形成菌落的大小，说明对各种氮源的利用情况。

四、酵母菌生长曲线的测定试验 

1、将培养24小时左右的酵母斜面菌种，用无菌水洗下菌苔，以3000转/分的速率离心，得菌体。将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后，制备酵母菌悬液（细胞数量约106左右/毫升），测数备用。

2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中，<25℃>下培养，以此为起始时间，记录起始溶液的细胞数。并在培养1，2，4，6，8，9，10，11，12，14，16，20，22，24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量。

3、酵母菌细胞数量的检测

    方法①：活菌计数法。此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后，取一定量体积（在0.1-1毫升之间）的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内，在<25℃>下培养24小时左右，计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量。

    方法②：血球计数板计数法。此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后，使菌落数约为105-106个/毫升，取一滴稀释液滴于血球计数板内，在显微镜下直接计算细胞总数。

4、绘制生长曲线

    以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标，以培养时间作为横坐标，画出酵母菌的生长曲线。并分析酵母菌群体的生长规律。