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金标检测试剂盒科研实验过种中一些基本的操作

时间:2017/6/29阅读:371
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金标检测试剂盒收集标本:血清、血浆(EDTA)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。
洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
标准品液配制:使用前加入1ml蒸馏水混匀,配成400ng/ml的溶液。设标准管8管,*管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在*管中加入400ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
检测程序
加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
洗板:同前。每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
洗板:同前。每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。每孔加入100ul终止液混匀。30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
金标检测试剂盒结果计算与判断
1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.以标准品40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0 ng/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。
3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应IGF-1R含量。
试剂盒性能
1.灵敏度:zui小的IGF-1R 检测浓度小于0.3ng/ml。
2.特异性:可同时检测重组或天然的人IGF-1R。不与人其它细胞因子有交叉反应。
3.重复性:板内、板见变异系数均小于10%。
注意事项
1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。
2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。
3.板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
5.本金标检测试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

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