上海莼试生物技术有限公司
初级会员 | 第2年

13585831301

ELISA试剂盒
ATCC细胞
细胞
蛋白
生化试剂
标准品
担体
中国药典标准物质
IBL试剂盒
*原时间试剂
血清
肉类及相关产品 实验室耗材系列 细胞系列 抗体纯化试剂 单抗、多抗研制用材料 细胞培养用材料和试剂 免疫分析相关试剂 免疫分析科研试剂盒 抗体纯化试剂盒 抗血清系列 动物血浆系列 热灭活血清系列 碳吸附过滤血清系列 培养细菌专用血清系列 动物血清系列(pet瓶) HRP标记抗原 天然纯化抗原 动物Ig类抗原 基因重组抗原 胶体金标记一抗(多抗为抗原亲和纯化,单抗为G或A蛋白亲和纯化 ) HRP标记二抗(抗原亲和纯化) HRP标记一抗(多抗为抗原亲和纯化,单抗为G或A蛋白亲和纯化) 多克隆抗体二抗/PcAb(未标注的为G或A蛋白亲和纯化) 多克隆抗体一抗/PcAb(未标注的为G或A蛋白亲和纯化) 单克隆抗体二抗/McAb(G或A蛋白亲和纯化) 单克隆抗体一抗/McAb(G或A蛋白亲和纯化) 裂解血 抗凝动物血系列 脱纤维动物血系列 无菌过滤动物血清系列 辐照灭菌动物血清系列 无菌采制动物血清系列
科研抗体
PCR试剂盒
科研细胞
细胞生物学试剂

血清热灭活

时间:2011/5/12阅读:713
分享:

www.hbzhan.com/st47745/product_1556887.html血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题,价格不菲的血清中含有诸如生长因子,维生素,氨基酸等珍贵物质,而将它们置于50℃以上的温度长达30分钟是*没有必要的。尽管如此,在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行,多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子,氨基酸等成分带来的负面影响,在我们的技术中zui常被提到的就是否该对血清进行热灭活,下面我们就对胎牛血清的热灭活进行一些探讨和解释。
根据调查,至少70%的研究者对血清的灭活仅仅是因为遵照常规操作,或者说认为是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等.其中zui常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高,许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立,只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。
热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。Triglia和Linscott曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定,他们发现胎牛血清中含有的C1,C6仅达成年动物血清的1-3%,而其它补体成分仅有成年动物的5-50%,至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验,我们也在多个不同批次的胎牛血清中获得了相似的结果。即使是在未稀释的血清中,也未发现有明显的溶血现象。另外,多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程,也对热敏的补体有灭活的作用。
在对补体灭活以外,热处理同时也对血清中可能存在的支原体具有灭活作用。多年以前,450纳米孔径的滤膜被用于加工血清时,血清中支原体的污染时有发生。针对这个问题,HyClone使用100纳米三层滤膜连续滤过技术,自从采用这项技术以及后来的40纳米滤过技术之后,我们的血清产品中没有再发现有支原体的污染,也是使得热灭活成为不必要的另外一个原因。
Pinyopummintr等证明血清去除灭活步骤不影响牛胚胎的发育分化;有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用,在用SV-BHK、BALB-3T3、CV-1、FS-4细胞对细胞粘附实验中,热灭活对胎牛血清的影响小于对小牛血清的影响。
我们调查了热灭活对胎牛血清以及对其中不同细胞株生长能力的影响。通过比较11个不同细胞株,发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纤维细胞,MRC-5)的生长带来负面影响,三个细胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响,而只有两个细胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在热灭活之后,细胞生长有轻微的改善。所以,在正常的操作下,热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。
在正常操作下,热灭活经常给血清产品带来负面的影响,对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生,而导致的沉淀又常常被认为是微生物的污染。注意到这个现象之后,为了验证污染的存在,或者促进沉淀的溶解,许多培养者往往将血清放置37℃温育。这却往往使情况变得更糟,血清中的蛋白进一步的析出,为了确信血清未被污染,进行的镜检,无菌培养试验,和革兰氏染色试验更是浪费了实验者大量的时间和精力。
总之,多数细胞培养中血清的热灭活并不是必要的。很多场合下,热灭活并不会改善细胞的生长,却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下,其促进的比率也是微不足道的。另外,血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染,从而给用户和供应商都带来不必要的麻烦。我们建议,对于那些对血清进行灭活的用户,需要通过试验来证实其必要性,确定灭活的适当条件;在灭活过程中,需要严格认真监测,并选择一个可重复的方案进行操作
 

会员登录

×

请输入账号

请输入密码

=

请输验证码

收藏该商铺

X
该信息已收藏!
标签:
保存成功

(空格分隔,最多3个,单个标签最多10个字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我们将在第一时间回复您~
拨打电话
在线留言