正常人羊膜细胞（HAM）原代细胞培养

时间：2011-5-17阅读：586

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上海莼试生物技术有限公司
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实验材料：
1. 人胎盘；
2. PBSA/GASP：含抗生素的PBSA（*，50μg/ml；*，1.25μg/ml；*100μg/ml；*100U/ml）；
3. 丙三醇；
4. 含50%丙三醇的DMEM；
5. */EDTA；
6. Millicell微孔膜组织培养插片；
7. 塑料刮片和无菌棉拭子；

实验方法：
1. 用PBSA/GASP清洗组织；
2. 分离人羊膜，用戴手套的手从胎盘上将羊膜钝性分离下来，分离出的羊膜薄层包括上皮细胞，基底膜和一些基质组织；
3. 用无菌棉拭子除去基底膜下的基质组织，使分离的羊膜尽可能的薄；
4. 在监测供者血清以除外疾病的时期，可以将粗分离出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中，-70℃存放；
5. 临用前解冻人羊膜，用PBSA清洗后将其切成直径约为2mm的小块；
6. 用*/EDTA消化组织块，37℃，30min；
7. 用塑料刮片轻刮消化过的人羊膜，除去上皮细胞，注意不要破坏基底膜；
8. 用PBSA清洗裸露的羊膜，并将它的基底膜面（去除上皮细胞的面）黏附在Millicell微孔膜组织培养插片上；

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