牛呼吸综合症病毒抗体Elisa试剂盒使用说明

牛呼吸综合症病毒抗体Elisa试剂盒使用说明

^{Elisa试剂盒}标本要求 
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
^{Elisa试剂盒}操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

16pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
8pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
4pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
2pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
^{Elisa试剂盒}操作程序总结：
1.准备试剂，样品和标准品
2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟 
3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟
4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟
5.加入终止液
6.15分钟之内度OD值