人睾酮（T）ELISA试剂盒使用原理

　　人睾酮（T）ELISA试剂盒使用原理
　　
　　检测范围：96T
　　
　　0.4nmol/L-12nmol/L
　　
　　使用目的：人睾酮T用于测定人血清、血浆及相关液体样本中睾酮（T）含量。
　　
　　实验原理
　　
　　应用双抗体夹心法测定标本中人睾酮（T）水平。用纯化的人睾酮（T）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入睾酮（T），再与HRP标记的睾酮（T）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的睾酮（T）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人睾酮（T）浓度。
　　
　　操作方法
　　
　　1.标准品的稀释：人睾酮T提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
　　
　　12nmol/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
　　
　　6nmol/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
　　
　　3nmol/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
　　
　　1.5nmol/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
　　
　　0.75nmol/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
　　
　　2.加样：人睾酮T分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
　　
　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
　　
　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
　　
　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
　　
　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
　　
　　7.温育：操作同3。
　　
　　8.洗涤：操作同5。
　　
　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
　　
　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
　　
　　11.测定：人睾酮T以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
　　
　　Eugon肉汤EugonBroth250g/瓶广泛用于微生物的培养
　　
　　Eugon琼脂EugonAgar250g/瓶广泛用于微生物的培养
　　
　　胰蛋白示磷酸盐肉汤TryptosePhosphateBroth250g/瓶用于苛养菌的增菌和培养
　　
　　小牛浸液肉汤VealInfusionBroth250g/瓶用于苛养菌的培养
　　
　　小牛浸液琼脂VealInfusionAgar250g/瓶用于苛养菌的培养
　　
　　动力-硝酸盐培养基（A法）Power-nitrateMedium250g/瓶用于细菌的动力试验
　　
　　动力-硝酸盐培养基（B法）Power-nitrateMedium250g/瓶用于细菌的动力试验，每200ml培养基中需添加1支甘油（甘油）
　　
　　*琼脂FerrousSulfateAgar250g/瓶用于细菌产硫化氢试验
　　
　　明胶培养基gelatinculturemedium250g/瓶用于细菌的明胶生化试验
　　
　　*发酵培养基MannitolFermentationMedium250g/瓶用于*发酵试验
　　
　　*培养基MannitolMedium250g/瓶用于*发酵试验
　　
　　醋酸铅培养基LeadAcetateMedium250g/瓶用于细菌产硫化氢试验，每100ml培养基中添加1支10%醋酸铅溶液