硫酸*LISA试剂盒使用步骤

硫酸*LISA试剂盒使用步骤

工作液准备

1 硫酸多粘菌素标准品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20（1+19）稀释备用

3 *：用蒸馏水按1:10（1+9）稀释备用

4 显色剂：已备用，避免光线直照

5 反应终止液：已备用

样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）

1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液

2强力振荡3分钟

3用Whatman 滤纸过滤

4取100μl处理后的样品，加入400μl*

5取25μl处理后的样品，加入25μl*于反应孔中（样本稀释倍数为2）

硫酸多粘菌素步骤

1 实验须知

1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（252℃），时间约2小时。回温室温（252℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。

1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

1.3 请不要改变分析程序

1.4 请使用的微量移液器

1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序

1.6 ELISA结果的可重复性*程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作

1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

2 分析步骤

2.1 预*行编号，标记B0、标准品和样品的位置，*进行双孔检测

2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

2.3 样品稀释液（10）、浓缩洗涤液（20）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释）

2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液

2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液

2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液

2.7 在所有孔中加入50μl的抗硫酸多粘菌素抗体酶结合物

2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。

3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）

甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。

4 反应

4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加 50μ显色液B；轻微晃动反应板使之*混匀

4.2 37℃温浴10min

4.3 每孔中加入50μl终止液，混匀

4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。