在金标检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很首要的,其间包括:
(1) 固相载体的选择:很多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在运用前均可进行选择:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,查询其显色反应是不是均一性,据此判明其吸附功能是不是出色。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:金标检测试剂盒将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,恳求纯度要好,吸附时通常恳求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,通常多选用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相一同,查询阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量zui少的浓度。对于大都蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶符号抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采用“方阵法”(包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度)在正式实验系统里地滴定其工作浓度。
(4) 金标检测试剂盒酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择恳求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应留心防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是如今较为满足的供氢体。底物作用一段时间后,应参与强酸或强碱以中止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜制造,尤其是H2O2在临用前参与。