新生小牛血清制备

新生小牛血清制备

一、目的: 

为了保障新生小牛血清产品质量的均一性和稳定性，制定以下操作方法，以规范新生小牛血清生产制备。

二、操作方法：

（一）采血

1、 挑选出生在48小时以内的新生小牛，空腹8小时以上，以便排空腹内母乳。

2、 将小牛清洗干净后，侧放在万级洁净房间内的采血台上，固定四肢及头部。

3、 用来苏水清洗小牛颈部，刮去颈部牛毛，露出颈部一侧皮肤，用2%碘酒擦拭消毒。

4、 在脖颈处切开一道10~20厘米的切口，避免切到血管，取出血管，用*夹住血管近心端，在远心端除去血管包膜，分离出动脉血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，切开1厘米左右的切口进行插管，插好管后打开近心端的*，让牛血顺*流入另一个洁净房间内的采血瓶中。

5、 采血瓶采血前经干烤灭菌（180℃ 2小时）后，按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口，于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水，使其充分湿润瓶壁后倒出，再进行采血并加塞封口。

6、 将采血后的采血瓶放37℃ 恒温室2小时，再放入4℃冷库 4小时以备离心。

（二）离心

将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后，对称放入离心机，按1800转/分钟 离心50分钟后，放入4℃冷库备用。

（三）抽血清

      取出4℃冷库离心好的采血瓶，注意轻抬轻放，以免将下层血块和血清混层。将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔一端的管子接好空气滤器，再接到压缩机抽气口上。打开压缩机，用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下层血块。将抽好的血清分装，即为粗制血清，放入-20℃冷库冷藏备用。

（四） 血清过滤

1、 将-20℃冷库内的粗制血清取出化冻。

2、 将化冻后的粗制血清用经过高压灭菌的8层纱布进行初滤。

3、 把初滤后的血清倒入大罐进行混合。

4、 将装好滤芯的滤器做密封性试验和发泡试验合格后，经过高压灭菌，在洁净室内用无菌操作法将滤器按滤柱孔径由大到小的顺序进行组装，并装上压力表。把滤器大孔径一端和蠕动泵出口进行连接。

5、 用蠕动泵将大罐内的血清送入滤器进行过滤。

6、 将滤出的血清在百级净化操作台上进行分装后，即为精制小牛血清，送-20℃冷库储存。

三、注意事项：

1、在操作过程中，要经常用75%的酒精对手部进行消毒，同时避免接触牛血或血清，特别是有伤口的部位，以免感染。

2、在采血插管过程中，插管避免接触到未消毒的部位，尽量深入血管，使牛血能快速流完为好，并固定好插管，避免脱离动脉血管。

3、在抽血清的过程中，控制好压缩机的压力大小，避免压力过大，抽到下层的沉淀物。

4、在过滤过程中，控制好压力的大小，避免超过滤柱工作压力。