抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒 返回列表页

抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒

商品介绍：

检测缓冲液———————————15ml

显色底物————————————2管

酒石酸溶液———————————1ml

p-nitrophenol溶液(10mM)—————0.1ml

反应终止液———————————20ml

酸性磷酸酶也称酸性磷酸酯酶，在酸性条件下可以催化磷酸酯键的水解。酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。酸性磷酸酶主要分为两类，一类为抗酒石酸酸性磷酸酶，一类为抗氟离子酸性磷酸酶。

抗酒石酸酸性磷酸酶是一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞和破软骨细胞中高表达。在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。抗酒石酸酸性磷酸酶在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧产生和铁离子转运等有关。抗酒石酸酸性磷酸酶可以被破骨细胞释放到血液中，几乎被认为是是机体破骨活性的血液指标。

在一些疾病状态下，如白血病性网状内皮组织增生症、戈谢病、艾滋病导致的脑病、破骨细胞瘤、骨质疏松和代谢性骨疾病有关。TRAP敲除小鼠有轻微的骨骼石化症，TRAP转基因小鼠有轻微的骨质疏松。

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol (p-nitrophenol)在碱性条件下，呈黄色产物，可以在400-415nm检测吸光度。产物黄色越深， 说明酸性磷酸酶检活性越高，反之则酶活性越低。据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测，检测得到的酸性磷酸酶活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶活性。

注意事项：

1. 如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐采用孵育30分钟等较长的时间，以减小操作过程中的时间误差。同时如果样品中酶活性较高，则可以预先适当稀释样品。

2. 样品溶液中须避免出现各种酸性磷酸酶抑制剂。

商品属性：

步骤和注意事项：‌

准备实验环境：‌确保实验区域清洁，‌使用酒精清洁计数板和盖玻片，‌然后用吸水纸轻轻擦干。‌

细胞培养：‌

准备试管或培养皿、‌细胞培养基和待培养的细胞。‌

取出保存于低温下的细胞苗，‌并加入培养基中，‌摇晃混合均匀。‌

用移液管将细胞培养基和细胞种植在试管或培养皿中。‌

将试管或培养皿放置于恒温培养箱中，‌定期更换培养液。‌

细胞冻存与复苏：‌

细胞系的冻存是将生长较好的传代细胞悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中，‌以一定的冷冻速率降至零下某一温度，‌并在此温度下对其长期保存的过程。‌

复苏则是将冻存的细胞系恢复到常温的过程，‌原则是“慢冻快融"，‌以较大限度地保存细胞活力。‌

细胞计数：‌

制备细胞悬液，‌使用消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，‌制成单个细胞悬液。‌

在显微镜下，‌用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，‌细胞压中线时，‌只计左侧和上方者，‌不计右侧和下方者。‌

荧光显微镜使用：‌

使用荧光染料对细胞进行染色，‌并观察细胞所发出的荧光信号，‌以研究细胞结构和功能。‌

聚合酶链反应（‌PCR）‌：‌

准备PCR反应所需的DNA模板、‌引物、‌聚合酶和核苷酸。‌

按照PCR反应液配制表制备反应液。‌

在反应器中加入反应液，‌开始PCR反应。‌

PCR反应的成功与否，‌可以通过电泳、‌测序等方法进一步确认。‌

转染：‌

准备转染所需的载体DNA和细胞。‌

制备转染试剂，‌将DNA载体溶解于转染试剂中，‌与细胞混合均匀。‌

处理转染细胞，‌并进行下一步实验。‌

在操作过程中，‌应注意实验室安全规范，‌避免随意丢弃垃圾，‌及时登记购买耗材或试剂，‌保持实验环境的清洁和安全

下列是公司正在出售的产品：