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货号 | CS-C8746 | 货期 | 1~3天 |
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规格 | 100ml | 英文名称 | Improved Citrate Antigen Retrieval Solution |
用途 | 仅供科研研究实验 |
商品介绍:
本品是一种在的柠檬酸钠抗原修复液的基础上进行优化改进,可以更好地用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复试剂。
商品属性:
货号 | 规格 | 货期 | 英文名称 |
CS-C8746 | 100ml | 1~3天 | Improved Citrate Antigen Retrieval Solution |
在大多数情况下,改进型柠檬酸钠抗原修复液比普通的柠檬酸钠抗原修复液在相同染色条件下获得的特异性染色信号更强,背景更低。
细胞或组织用多醛、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致蛋白之间的交联(cross-link),从而遮蔽样品的抗原位点,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果。
本抗原修复液采用了经过改进的柠檬酸钠缓冲液,可以更有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而更好地改善免疫染色效果。
通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果,但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时,可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看,无论冰冻切片还是细胞爬片等,只要是用多醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品,进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联,充分暴露抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
一个包装的本产品可以配制成5000毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要10毫升抗原修复液(1X)计算,一个包装的本产品可以用于500个样品。
注意事项:
1. 抗原修复过程可以使用的染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。塑料染色缸、染色架和邮寄夹可以很好地耐受沸水浴,而玻璃染色缸需避免骤冷骤热导致的玻璃破碎。
2. 本抗原修复液使用前必须用重蒸水或Milli-Q水稀释50倍,配制成抗原修复液(1X)。
3. 冻存的本产品需适当加热后才能溶解。同时由于本产品含有少量的特殊去垢剂,加热后会产生非常细密的气泡而呈现非常均匀的类似浑浊状,属于正常现象,并非不溶解或产生了沉淀。室温放置较长时间后,例如1-2天,溶液会澄清。对于溶解后呈现非常均匀的类似浑浊状的本产品,此时即可取适量稀释后使用。抗原修复过程中加热时也会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状,也属于正常现象,请放心使用。
步骤和注意事项:
准备实验环境:确保实验区域清洁,使用酒精清洁计数板和盖玻片,然后用吸水纸轻轻擦干。
细胞培养:
准备试管或培养皿、细胞培养基和待培养的细胞。
取出保存于低温下的细胞苗,并加入培养基中,摇晃混合均匀。
用移液管将细胞培养基和细胞种植在试管或培养皿中。
将试管或培养皿放置于恒温培养箱中,定期更换培养液。
细胞冻存与复苏:
细胞系的冻存是将生长较好的传代细胞悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中,以一定的冷冻速率降至零下某一温度,并在此温度下对其长期保存的过程。
复苏则是将冻存的细胞系恢复到常温的过程,原则是“慢冻快融",以较大限度地保存细胞活力。
细胞计数:
制备细胞悬液,使用消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞,制成单个细胞悬液。
在显微镜下,用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数,细胞压中线时,只计左侧和上方者,不计右侧和下方者。
荧光显微镜使用:
使用荧光染料对细胞进行染色,并观察细胞所发出的荧光信号,以研究细胞结构和功能。
聚合酶链反应(PCR):
准备PCR反应所需的DNA模板、引物、聚合酶和核苷酸。
按照PCR反应液配制表制备反应液。
在反应器中加入反应液,开始PCR反应。
PCR反应的成功与否,可以通过电泳、测序等方法进一步确认。
转染:
准备转染所需的载体DNA和细胞。
制备转染试剂,将DNA载体溶解于转染试剂中,与细胞混合均匀。
处理转染细胞,并进行下一步实验。
在操作过程中,应注意实验室安全规范,避免随意丢弃垃圾,及时登记购买耗材或试剂,保持实验环境的清洁和安全
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