Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法) 返回列表页

细胞生物学研究有以下几个方面：

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括：

①细胞核、染色体以及基因表达的研究；

②生物膜与细胞器的研究；

③细胞骨架体系的研究；

④细胞增殖及其调控；

⑤细胞分化及其调控；

⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)；

⑦细胞的起源与进化；

⑧细胞工程.

细胞生物学研究的常用技术有哪些：

1.显微技术：包括显微观察,显微操作.

2细胞组分分析技术：离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程：细胞培养。

Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)Ki67 通常通过标记抗Ki67 的抗体（FITC 绿色荧光）和DNA 染料碘化丙啶（PI，红色）而利用流式细胞仪检测来实现对细胞周期的检测。

操作方法

1. 在适的环境下培养细胞。

2. 除去培养液，用PBS 洗一次。

3. 胰蛋白处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。

4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）

5. 沉淀细胞，吸去上清。

6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。

7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul Ki67 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。

8. 离心收集细胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。

9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。

10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。

11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。

Ki67 蛋白是细胞周期相关的一种核蛋白，主要表达于细胞增殖分裂的各个时期（G1、S、G2 和M 期），但是在静息的细胞（G0 期）中不表达。Ki67 常用于检测肿瘤细胞的生长指数（免疫组化法利用计算细胞总数中的Ki67 阳性细胞数所占比例得到Ki67 指数）。

注意事项：

1. 本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，为取得良好的使用效果，*次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，可以离心去除后使用，经测试不会影响后续的检测效果。

2. 检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。

3. 使用说明中提供了检测ATP标准品的方法，实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。
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