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当前位置：上海莼试生物技术有限公司>>科研细胞>>细胞系>> Sp2/0-Ag14SP2/0 (小鼠骨髓瘤细胞)
| 货号 | CS-X2441 | 规格 | 1×106cells/T25培养瓶 |
|---|---|---|---|
| 生长特性 | 悬浮细胞 | 鉴定 | STR鉴定正确 |
产品信息：
货号 | CS-X2441 | 种属 | 小鼠(B细胞)，小鼠（骨髓瘤细胞） |
生长特性 | 悬浮细胞 | 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
温度 | 液氮 | 培养条件: | 气相：空气，95%；CO2，5% |
鉴定 | STR鉴定正确 | 生长培养基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
商品介绍：
产品名称：Sp2/0-Ag14SP2/0 (小鼠骨髓瘤细胞) 种属 小鼠(B细胞)，小鼠（骨髓瘤细胞） 年龄（性别） 不详 组织来源 脾脏 生长特性 悬浮细胞 细胞形态 淋巴母细胞样 背景描述 Sp2/0-Ag14细胞是由绵羊红细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞和P3X63Ag8骨髓瘤细胞融合得到的。Sp2/0-Ag14细胞不分泌免疫球蛋白，对20μg/ml的8-氮niao嘌呤有抗性，对HAT比较敏感；Sp2/0-Ag14细胞可以作为细胞融合时的B细胞组分用于制备杂交瘤；鼠痘病毒阴性。 生物安全等级 1 生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL 推荐换液频率 2~3次/周 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 抗原表达情况 H-2d 注意事项 该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。 保藏机构 ATCC; CRL-1581 ATCC;CRL-8287 DSMZ;ACC-146 ECACC;85072401 |
细胞保存方法：
（一）细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
注意事项：
1）、欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80～90%致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其性质，应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
2）、细胞在液氮中可长期冻存无，而不会影响细胞活力;在-70度可保存数月。
3）、注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0. 22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小体积分装，4 ℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。
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操作步骤：
1）、冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。
2）、配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜 (DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。
3）、离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。
4）、取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSO后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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