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当前位置：上海莼试生物技术有限公司>>科研细胞>>细胞系>> SiHa (人子宫颈鳞癌细胞)
| 货号 | CS-X2209 | 规格 | 1×106cells/T25培养瓶 |
|---|---|---|---|
| 生长特性 | 贴壁细胞 | 鉴定 | STR鉴定正确 |
产品信息：
货号 | CS-X2209 | 种属 | 人 |
生长特性 | 贴壁细胞 | 细胞形态 | 上皮细胞样 |
温度 | 液氮 | 培养条件: | 气相：空气，95%；CO2，5% |
鉴定 | STR鉴定正确 | 生长培养基 | MEM＋10% FBS＋1% P/S |
商品介绍：
产品名称：SiHa (人子宫颈鳞癌细胞) 种属 人类 年龄（性别） 女性，55岁 组织来源 子宫颈鳞癌 生长特性 贴壁细胞 细胞形态 上皮细胞样 背景描述 SiHa细胞是建自一个日本病人的外科手术的原位组织样品。电镜观察表明，在SiHa细胞连接处有典型的桥粒，在SiHa细胞胞质中有丰富的张力丝。在裸鼠中，SiHa细胞能形成低分化的表皮样癌(Ⅲ级)；SiHa细胞中，癌基因PRB和p53阳性。 生物安全等级 2 [Cells contain human papilloma virus] 生长培养基 MEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例 1:3-1:4 推荐换液频率 2~3次/周 倍增时间 ~50-60小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 致瘤性 Yes, in nude mice; forms poorly differentiated epidermoid carcinoma (grade III). 基因表达情况 Oncogenes: p53+; pRB+ 保藏机构 ATCC; HTB-35 |
细胞保存方法：
（一）细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
注意事项：
1）、欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80～90%致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其性质，应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
2）、细胞在液氮中可长期冻存无，而不会影响细胞活力;在-70度可保存数月。
3）、注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0. 22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小体积分装，4 ℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。
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操作步骤：
1）、冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。
2）、配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜 (DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。
3）、离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。
4）、取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSO后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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