1. 聚苯乙烯塑料微量组织培养板：4×10孔。
2. 包被液（pH9.6）：NaHCO3 29.3g、Na2CO3 19.5g，蒸馏水加至1000ml，置4℃保存。
3. 洗涤液（0.01mol/L、pH7.4PBS）：NaCl 8.0g、KH2PO4 0.2g、Na2HPO4•12 H2O 2.9g、KCl 0.2g、Tween20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。
4. 保温液：牛血清白蛋白（BSA） 0.1g、0.05% PBSTween20 100ml，4℃保存。
5. 底物溶液（OPDH2O2）
磷酸盐柠檬酸缓冲液（pH5.0）：0.2mol/L Na2HPO4（28.4g/L）25.7ml、0.1mol/L柠檬酸（19.2g/L）24.3ml、蒸馏水50ml。
底物溶液：磷酸盐柠檬酸缓冲液100ml、邻苯二胺（OPD）40mg、30%H2O2 0.15ml，现配现用。
6. 终止液（2mol/L H2SO4）：浓硫酸22.2ml、蒸馏水177.8ml。
7. 猪流行性腹泻（PED）抗原：PEDV猪胎肠原代细胞培养物，反复冻融，65℃ 30min灭活。zui后以3 000 r/min离心30min，取上清分装，-20℃保存备用。抗原的蛋白浓度为300μg/ml。
8. 酶标兔抗猪抗体结合物：酶结合物效价为1∶10 000。
9. 被检猪血清：采自疫区猪和病猪。PEDV免疫猪血清及健猪血清分别用于阳性、阴性对照。
酶联免疫吸附试验检测仪
1. 抗原包被：用包被液将PEDV抗原作1∶5稀释包被反应板，每孔100μl，同时设阴性细胞培养物对照孔，置4℃。
2. 洗涤：用洗涤液洗涤2次，每次2min，沥干。
3. 加入被检血清：用保温液将被检血清作1∶100稀释，加入反应板相邻的两个孔中，每孔100μl。同时作阴、阳性标准血清对照，置37℃孵育1h。
4. 洗涤3次：方法同上。
5. 加入酶结合物：用保温液将酶结合物作1∶4 000稀释，加入反应孔中，每孔100μl，置37℃孵育1h。
6. 洗涤3次：方法同上。
7. 加入底物：每孔100μl，置室温暗盒内显色20min。
8. 加入终止液：每孔50μl，静置5min。
9. 测定OD值：用检测仪，于492nm波长，按仪器使用及制定标准要求调节仪器，测定各反应孔的OD值，记录结果。
结果判定凡检测血清P/N值超过14的，均判为阳性。肉眼观察，凡反应孔的颜色比正常细胞对照孔、正常血清对照孔颜色深者为阳性。
1. 在各载体中使用zui多的为聚苯乙烯塑料板。不同厂牌，甚至不同批号的反应板吸附性能往往有很大差异，因此使用前需要加以选择。方法为：在整块板上测定同一标本，求出每一对孔的平均OD值，将此值与该板的总均值相比，其差值需在±10%以内。
2. 为了增加聚苯乙烯板对某些抗原或抗体的吸附作用，可试用鞣酸处理，牛血清白蛋白处理，改变载体的表面电荷，引入化学基团等方法处理反应板。
3. 如非特异性吸附较强，需考虑采用封闭等方法排除。
1） 封闭：可选用4%～10%牛血清白蛋白、10%小牛血清、10%马血清、01%～25%明胶等。
2） 去污剂：可阻止非特异吸附，而不影响特异性抗原抗体反应。常用的有005%～05%吐温20、吐温80、01%NP40等。
3） 高盐浓度缓冲液：如含05mol/L NaCl及0.05%吐温的磷酸盐缓冲液（pH8）。
4） 缩短孵育时间：保温液中加入终浓度4%的聚乙二醇（PEG，MW6 000）
可缩短抗原抗体反应的孵育时间（20min以内）。
4. 由于反应板可能存在边缘效应，因此测定标本时至少要取两孔的平均值。
5. 各种常用的酶标反应比色计性能不一，测定时需根据各自的仪器确定阈值。
