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人S100钙结合蛋白A8/钙粒蛋白A elisa试剂盒操作步骤

时间：2014/5/21阅读：183

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资料类型
WORD 文档
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标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40μg/L	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
20μg/L	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
10μg/L	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
5μg/L	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
2.5μg/L	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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