实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)表达。用纯化的抗体包被

微孔板，制成固相抗体，可与样品中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)相结合，经洗涤除去未结合

的抗原和其他成分后再与HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻

底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成

zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF 值相比较，从而

判定标本中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在与否。

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。