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小鼠肠脂肪酸结合蛋白,小鼠肠脂肪酸结合蛋白ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒操作步骤

时间:2012-12-6阅读:411
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小鼠肠脂肪酸结合蛋白ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒操作步骤:

1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40 IU/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

20IU/L

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

10IU/L

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

5IU/L

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

2.5IU/L

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。  

4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3

8.         洗涤:操作同5

9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.

10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

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