上海沪宇生物科技有限公司

SD大鼠神经视网膜组织分离和鉴定

时间:2013-9-5阅读:1668
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实验试剂
1%戊*钠,液氮,HE染色剂,4%多聚甲醛,二甲苯,苏木素-伊红,2.5%戊二醛,0.1mol/L磷酸缓冲液,1%饿酸,丙酮,环氧树脂618,醋酸铀,枸椽酸铅
实验设备
解剖显微镜,冻存管,光镜,LKB超薄切片机,透射电镜(transmission electron- microscopeTEM)
实验材料
成年雄性SD大鼠
实验步骤
1. 成年雄性SD大鼠50只,体重300 g左右。1%戊*钠30 mg/kg,腹腔注射,颈推脱臼处死。
2. 摘除眼球,分离神经视网膜组织。
3. 解剖显微镜下沿角膜缘切开眼球,去除角膜、晶体和玻璃体,剥离神经视网膜组织,用预冷去离子水冲洗,滤纸吸干水分。置冻存管内,用做组织总蛋白提取。
4. 部分分离的神经视网膜组织,立即液氮冻存。7 um快速冰冻切片,HE染色,封片镜检。
5. 部分神经视网膜组织,立即用4%多聚甲醛固定24小时,常规石蜡包埋,4um连续切片,二甲苯脱蜡,苏木素-伊红染色,常规脱水,透明,封片,光镜观察。
6. 部分神经视网膜组织,立即用2.5%戊二醛4固定2小时,0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗,1%饿酸后固定2小时,丙酮梯度脱水,环氧树脂618包埋,LKB超薄切片机切片,电子染色、醋酸铀、枸椽酸铅各15 min。透射电镜(transmission electron- microscopeTEM)观察摄片。
 
 

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