原位杂交结合免疫组织化学技术主要用于在同一细胞内同时或先后检测特定基因在核酸和蛋白质或多肽水平的表达，这样不仅能了解基因表达，而且还能研究某种基因表达的翻译和转录调节。如果免疫组织化学检测的抗原成分是与原位杂交的靶核酸不同基因编码的蛋白质或多肽等，那么同时使用原位杂交和免疫组织化学技术可研究一种基因的转录与另一种基因编码的蛋白质合成之间的相互关系。在病毒学研究中，将原位杂交与免疫组织化学相结合，可在细胞水平上同时研究病毒基因及其表达产物——即病毒抗原的分布。如果将检测病毒基因的原位杂交与检测细胞类型特异性抗原的免疫组织化学相结合，则可鉴别受染细胞的类型，尤其对在含多种细胞类型的组织（如神经组织）中确定受染细胞的类型更有帮助。总之，原位杂交和免疫组织化学结合的双标记技术在深入研究基因表达的调控以及病毒性疾病的发病机制等方面具有广阔的应用前景。
原位杂交结合免疫组织化学技术可以分别在相邻的连续切片上进行。只要在相邻切片上能得到同一细胞的连续切面。对照观察相邻切片上同一细胞切面原位杂交和免疫组织化学结果，就可以判断在同一细胞内是否存在特定的靶核酸DNA或RNA和由该基因或另一种基因编码的蛋白质或多肽。
原位杂交结合免疫组织化学技术更多的是在同一细胞标本或组织切片上进行，这样可避免因相邻切片法观察时不易找到同一细胞的切面而产生的空间误差和样本误差。但采用同一切片的双标记技术时。*次标记染色过程总要或多或少地影响第二次标记染色的结果，使第二次染色结果不很理想。
在同一细胞和切片标本上进行原位杂交和免疫组织化学双标记时，可以先用原位杂交检测核酸，也可以先用免疫组织化学检测蛋白质。不同的检测程序各有其优缺点。
1．原位杂交在先 细胞和切片标本先用核酸探针做原位杂交，检测DNA或mRNA，接着再进行免疫组织化学反应。检测抗原成分。原位杂交可用放射性核素标记探针，也可用非放射性标记物标记探针，免疫组织化学可用ABC法等。先做原位杂交，尤其是RNA原位杂交标本中的mRNA丢失较少，杂交信号较强。但是，在原位杂交的操作过程中，可能会影响抗原物质的抗原性，会减弱免疫组织化学的染色强度。
标本先做原位杂交，操作步骤基本上按单做原位杂交的程序进行。只是由于杂交前的蛋白酶消化会改变蛋白质的三维结构，从而导致抗原性改变，所以应用时要小心，蛋白酶消化的时间要适度，不可过长。杂交和洗涤的温度不要超过45~C，杂交温度过高会导致抗原物质变性。
如用放射性核素标记探针进行原位杂交，放射自显影可在杂交反应后立即进行，也可在免疫组织化学反应完成后进行。如在放射自显影完成后再进行免疫组织化学染色，组织标本上的核乳胶薄膜可能会影响抗体分子的穿透。
如用地高辛标记的非放射性核素探针进行原位杂交与免疫组织化学双标记，可在杂交反应后将原位杂交检测核酸的抗地高辛抗体（Fab’段）与免疫组织化学检测蛋白或多肽的*抗体混合在一起，一同孵育标本。之所以两种抗体能相混合同时孵育标本，是因为检测核酸的抗地高辛抗体只有Fab’段，不具有抗体抗原决定簇的Fc段，而检测蛋白或多肽的免疫组织化学程序中的第二抗体是以其Fab’段与*抗体的Fc段结合而反应的，不能与抗地高辛抗体结合，因此，原位杂交中的抗体与免疫组织化学中的抗体混合孵育标本不会产生交叉结合。这两种抗体混合孵育标本可明显缩短原位杂交和免疫组织化学结合的双标记实验周期。
2．免疫组织化学在先 细胞和切片标本先用特异性抗体经免疫组织化学检测其中的相应抗原成分．接着用核酸探针做原位杂交，显示同一细胞或标本内的DNA或mRNA。免疫组织化学技术多用ABC法，显色剂可用DAB、PPD（Para-phenylenediamine）或AEC（3—amino-9—ethyl-carbazole）。当与放射性核素的原位杂交结合时，DAB或PPD显色所呈的棕褐色或棕黑色阳性产物在随后的原位杂交的操作过程中比较稳定，不会褪色。如果用AEC作显色剂，阳性产物呈红色，它与原位杂交放射自显影的阳性信号黑色银粒对比更加鲜明，易于在同一细胞内分辨出来。但由于AEC的阳性产物能溶于乙醇等有机溶剂，因此在随后的原位杂交操作过程中不能用乙醇脱水，可代之以空气干燥。
免疫组织化学若与*或地高辛等非放射性标记探针的原位杂交相结合。在选择检测系统时应考虑到两个系统之间是否存在相互干扰。再者，在选用显色剂时，免疫组织化学和原位杂交zui终的两种成色阳性产物应易于分辨。
*行免疫组织化学反应。后进行原位杂交。通常抗原能较好地显示，但靶核酸有可能在进行免疫组织化学的过程中易于遭到破坏。当靶核酸是mRNA时，则要求整个免疫组织化学染色过程必须在无RNA酶的条件下进行。

原文地址:/biotech/exp/TechArticle/2009/e81955750.html