上海沪宇生物科技有限公司

Feulgen反应实验步骤

时间:2012-4-13阅读:2720
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标本需经固定后方可染色,Carnoy固定液可按无水乙醇:三 氯 甲烷:冰 醋 酸为6:3:1比例配制。固定后石蜡切片即可。尽量不用新鲜组织恒冷箱切片,因胞质中存在的缩醛 磷脂会出现非特异染色。若必须使用恒冷箱切片,需做切片后固定。用已固定的组织石蜡切片可消除缩醛 磷 脂。减少非特异染色,具体操作如下:

1.切片脱蜡入水;
2.用lmol/L H Cl浸洗;
3.切片放人预热到60℃1mol/LH Ci内6分钟,(固定的标本为10~15分钟.Susa固定的标本为18分钟,水解时间因固定液不同而有差异);
4.入室温lmol/LH  Cl洗;
5.蒸馏水洗;
6.人Schiff液,于室温暗处(或外包黑纸)30~60分钟;
7.人亚硫 酸 钠水溶液漂洗3次,每次1~2分钟;
亚硫 酸 钠水溶液配法:
10%NaHS03 5ml
1mol/L HCl 5ml
加蒸馏水至 100ml
8.蒸馏水洗;
9.脱水、透明、封固。
结果:细胞核内DNA染成紫红色
对照实验:
虽然Feulgen法是DNA 的特异染色方法,但如果延长水解时间并在室温下进行反应, Schiff试剂也与醛、酮、醇和缩醛磷脂起反应,因此用Feulgen法检测DNA时必须严格控制盐酸水解的时间和温度。为减少假阳性和非特异性染色必须做对照实验。可按上述步骤做平行对照实验,仅将第3步,即60℃ lmol/LHCl水解改为室温15分钟,其余与上述步骤相同,结果DNA应为Feulgen阴性反应。
Feulgen反应图
大鼠肾小体和肾小管细胞核呈nigert阳性反应,含紫红色反应产物

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