小鼠胃泌素elisa试剂盒,小鼠elisa试剂盒操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37 溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100 ,余孔分别加标准品或待测样品100 ,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37 温育2 小时。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2、弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A 工作液100 (临用前配制),酶标板加上覆膜,37 温育1 小时。
3、弃去孔内液体,甩干,洗板3 次,每次浸泡1-2 分钟,大约400 /每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4、每孔加检测溶液B 工作液(临用前配制)100 ,加上覆膜,37 温育1 小时。
5、弃去孔内液体,甩干,洗板5 次,方法同步骤3。
6、每孔加底物溶液90 ,酶标板加上覆膜37 避光显色(反应时间控制在15-30 分钟,当标准孔的前3-4 孔有明显的梯度蓝色,后3-4 孔梯度不明显时,即可终止)。
7、每孔加终止溶液50 ,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8、立即用酶标仪在450nm 波长测量各孔的光密度(OD 值)。
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