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人甘胆酸(CG)ELISA检测试剂盒注意事项
☆试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
☆加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性;一般加样时间控制在10分钟内,如果样本数量过多,可使用多道移液器。
☆孵育:样品要在密闭的容器内进行孵育,严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
☆洗涤:洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,同时要消除板底残留的液体和手指痕迹,避免影响zui后的酶标仪读数。
☆反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,10分钟左右),如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
☆建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
☆建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。
人甘胆酸(CG)ELISA检测试剂盒基本原理
就是将抗原抗体固定到特定的载体上进行反应,并通过酶催化底物发生化学变化将抗原抗体反应通过颜色的形式显现出来。
(1)将抗原抗体反应固相化:即试验中的包被环节,使抗原或抗体吸附于固相载体表面。其机制可能是聚苯乙烯表面间的疏水基团可以无选择性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破坏蛋白分子结构,保持其生物学特性和免疫学活性;
(2)封闭:固相吸附蛋白是非特异性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,为了保障抗原抗体反应的特异性,因此,包被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭。一般认为牛血清白蛋白是zui为理想的封闭剂,也可用脱脂奶粉、明胶、牛血清替代。
(3)抗原抗体反应:抗原或抗体在适当的介质下可进行特异的抗原抗体反应。 (4)酶反应:酶可以通过共价键与抗原或抗体连接形成结合物,当抗原抗体反应的时候,被检测靶目标中也结合了酶分子。
(5)ELISA试剂盒底物反应:结合在抗原抗体中的酶分子,可以促使底物发生颜色反应,检测人员可以裸眼观察,可以通过颜色来判定是否有免疫反应的存在,通过颜色的深浅判断标本中相应抗原或抗体的含量,也可借用酶标仪在适当的波长读取吸光度值。
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