大鼠叶酸（FA）ELISA试剂盒 返回列表页

大鼠叶酸（FA）ELISA试剂盒?质量保证：我告诉所有产品均需要经过质检通过后，才允许出库！
?适用范围：实验结果仅供科研参考，不推荐用于临床诊断结果。
?ELISA常用的方法：双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等，子科生物ELISA产品主要用双抗体夹心法。
?标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等
?产品性能：灵敏度高，特异性强，重复性。

大鼠叶酸（FA）ELISA试剂盒基本原理
就是将抗原抗体固定到特定的载体上进行反应，并通过酶催化底物发生化学变化将抗原抗体反应通过颜色的形式显现出来。
（1）将抗原抗体反应固相化：即试验中的包被环节，使抗原或抗体吸附于固相载体表面。其机制可能是聚苯乙烯表面间的疏水基团可以无选择性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破坏蛋白分子结构，保持其生物学特性和免疫学活性；
（2）封闭：固相吸附蛋白是非特异性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，为了保障抗原抗体反应的特异性，因此，包被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭。一般认为牛血清白蛋白是zui为理想的封闭剂，也可用脱脂奶粉、明胶、牛血清替代。
（3）抗原抗体反应：抗原或抗体在适当的介质下可进行特异的抗原抗体反应。 （4）酶反应：酶可以通过共价键与抗原或抗体连接形成结合物，当抗原抗体反应的时候，被检测靶目标中也结合了酶分子。
（5）ELISA试剂盒底物反应：结合在抗原抗体中的酶分子，可以促使底物发生颜色反应，检测人员可以裸眼观察，可以通过颜色来判定是否有免疫反应的存在，通过颜色的深浅判断标本中相应抗原或抗体的含量，也可借用酶标仪在适当的波长读取吸光度值。

注意事项
☆试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
☆加样：加样时，要控制加样速度，避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性；一般加样时间控制在10分钟内，如果样本数量过多，可使用多道移液器。
☆孵育：样品要在密闭的容器内进行孵育，严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
☆洗涤：洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，同时要消除板底残留的液体和手指痕迹，避免影响zui后的酶标仪读数。
☆反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，10分钟左右)，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
☆建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
☆建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线，试用几个标本)，如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。

操作步骤
1、 取出试剂盒，于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。
2、 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的样品，空白对照加入50μl的蒸馏水；
4、 在样品孔中加入10μl的生物素；(不含空白对照孔,切忌：生物素只加样品孔！)
5、在各孔中加入100μl的酶标记溶液；(不含空白对照孔)
6、将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1小时；(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)
7、 充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；(浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释)
8、酶标板洗涤后用吸水纸*拍干；
9、各孔加入显色剂A、B液各50μl；(不含空白对照孔)
10、20-25℃下避光反应15分钟；
11、各孔加入50μl终止液，终止反应；

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