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小鼠花生四烯酸-5-脂加氧酶(ALOX5)ELISA检测试剂盒实验测定具体步骤:
1.确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目,并增加 1 孔作为 TMB 空白显色孔。 总数=样品数+9;做双份检测时×2。其余重包装好放如冰箱中。
2.将标准品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加样品稀释液的作为零孔。对于血清、体液、 组织匀浆或细胞培养上清,直接加已用样品稀释液稀释的样品 100μ ι 。
3.酶标板加上盖,37℃反应 90 分钟。
4.反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。 不洗。
5.将准备好的生物素抗体工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白显色孔除 外)。37℃反应 60 分钟。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗涤 3 次,每次浸泡 1 分钟左右。
7.将准备好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白显色孔除外)。37℃反应 30 分钟。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗涤 5 次,每次浸泡 1-2 分钟左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分钟的 TMB 显色液,37℃避光反应 20-25 分钟 (注意:显色时间供参考,因用户实验室条件差异,显色时间会有所不同。此时肉眼可 见标准品的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色,后 3-4 孔差别不明显)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 终止液,此时蓝色立转黄色。
11.用酶标仪在 450nm 测定 OD值。
注意:客户收到我公司产品请*时间确认试剂盒是否有破损,酶标板是否封闭,使用前 TMB显色液应为无色透明溶液,若发现颜色异常,或者其他问题请及时与我司售后人员进行,我们会*次安排进行退换。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,底物请避光保存。使用之后所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理,以免造成污染!
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