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●规格: 96T/48T
●反应时间: 1-5h
●所需样本体积: 50-100ul
●检测波长: 450 nm
●用途: For research use only. Not for diagnostic use.
●特点:灵敏性高、特异性强、重复性好
●服务:子科生物所有的elisa试剂盒均可免费代测,全程Elisa实验技术指导。
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预期应用:ELISA法定量测定相关血清、血浆或其它相关液体中的含量/活性。
●标本的采集及保存:
1.血清:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
●操作步骤
各试剂在使用前平衡至室温。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外,余孔分别加标准溶液或待测样品100ul,注意不要有气泡,轻轻混匀,酶标板加上盖,37℃反应120分钟。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。
3. 每孔加检测溶液A工作液 100ul,37℃,60分钟。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
4. 每孔加检测溶液B工作液 100ul,37℃,60分钟,洗板5次,甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色30分钟(此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显)。
6. 依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时兰色立转黄色)。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
●注意:1.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
2.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。
●洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
●计算:以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
●注意事项:
1.洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
2.一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
3.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
4.如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。
5.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
6.底物请避光保存。
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